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糞腸球菌_
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糞腸球菌

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1. 適用范圍

GB/T 34224-2017標準適用于食品、環(huán)境樣品中屎腸球菌的檢測,，涵蓋傳統(tǒng)培養(yǎng)法（菌落形態(tài)觀察,、生化反應）和分子生物學方法（PCR技術）的應用場景[3]。

2. 核心檢測方法

標準規(guī)定兩種方法：
① 傳統(tǒng)培養(yǎng)法：預培養(yǎng)后使用選擇性培養(yǎng)基分離,，結合革蘭染色,、生化試驗（如膽汁七葉苷水解）鑒定；
② 分子生物學法：通過PCR擴增特定基因片段（如16S rRNA或毒力基因）進行快速檢測[3],。

3. 檢出限與定量限

傳統(tǒng)培養(yǎng)法：最低檢出限為1 CFU/g（或mL）,，定量范圍10^2-10^7 CFU/g；PCR法靈敏度更高,，可達10^1基因拷貝數(shù)/g[3],。

4. 質(zhì)控樣品要求

需設置陰性對照（無菌生理鹽水）和陽性對照（標準菌株ATCC 29212），實驗用水需符合GB/T 6682二級水標準,，培養(yǎng)基每批需做無菌驗證[3],。

5. 關鍵實驗步驟

① 樣品預處理：25g樣品+225mL無菌生理鹽水均質(zhì)；
② 選擇性增菌：36℃培養(yǎng)18-24小時；
③ 分離培養(yǎng)：使用哥倫比亞血瓊脂平板劃線,；
④ 確證試驗：包括PYR試驗,、45℃耐熱性試驗等[3]。

6. 特別說明

① 需在生物安全二級實驗室操作,；
② 糞腸球菌與屎腸球菌需通過阿拉伯糖發(fā)酵試驗區(qū)分,；
③ PCR檢測需防止氣溶膠污染，設置三重復實驗[3],。

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