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生孢梭菌_
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生孢梭菌

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生孢梭菌


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一、適用范圍

適用于藥品,、生物制品及醫(yī)療器具的無菌檢查中厭氧菌（生孢梭菌）的檢測與質(zhì)控,，涵蓋培養(yǎng)基靈敏度驗證、菌種復(fù)蘇培養(yǎng)及微生物限度檢查等場景[2][5],。

二,、核心檢測方法

1. 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(FTM)法：通過氧化層深度控制氧分壓，觀察菌體在培養(yǎng)基中分層生長特性
2. 庖肉培養(yǎng)基法：液體石蠟隔絕氧氣,，直接觀察菌體代謝產(chǎn)生的氣體與渾濁度變化
3. 哥倫比亞瓊脂平板法：需配合厭氧培養(yǎng)裝置,，通過菌落形態(tài)特征進行鑒定[2][5]

三、檢出限與定量限

1. FTM法靈敏度：≤10 CFU/mL（需氧/厭氧條件下均能檢出）
2. 平板計數(shù)法定量限：50-100 CFU/平板,，需在厭氧條件下培養(yǎng)24-48小時
3. 液體培養(yǎng)基稀釋法：可檢測至10??稀釋度的活菌存在[2][5]

四,、質(zhì)控樣品要求

1. 標(biāo)準菌株來源：CMCC(F)98001等權(quán)威保藏機構(gòu)認證菌株
2. 傳代要求：工作菌株傳代不超過5代，凍干粉啟封后需進行純度驗證
3. 活性驗證：每次實驗需同步進行陽性對照試驗[5][8]

五,、關(guān)鍵實驗步驟

1. 厭氧環(huán)境建立：使用厭氧罐/袋配合厭氧產(chǎn)氣包,，確保氧氣殘留＜1%
2. 菌液制備：凍干菌種復(fù)蘇后需連續(xù)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)≥2次
3. 培養(yǎng)觀察：35-37℃培養(yǎng)18-24小時,，觀察特征性惡臭味產(chǎn)生
4. 結(jié)果判讀：FTM培養(yǎng)基需觀察到明顯的混濁和還原層上移現(xiàn)象[2][5]

六、特別說明

1. 氧氣敏感性：暴露于空氣中超過30分鐘會導(dǎo)致菌體失活
2. 保存要求：長期保存需使用甘油管-80℃凍存,，避免反復(fù)凍融
3. 生物安全：操作應(yīng)在生物安全柜中進行,，接觸菌液后需121℃高壓滅菌30分鐘[2][5][8]

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