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支原體肉湯培養(yǎng)基(顆粒)/用于培養(yǎng)支原體的基礎培養(yǎng)基（含葡萄糖,、酚紅,；不含精氨酸）_
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支原體肉湯培養(yǎng)基(顆粒)/用于培養(yǎng)支原體的基礎培養(yǎng)基（含葡萄糖,、酚紅；不含精氨酸）

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操作視頻 | 肺炎支原體的靈敏度試驗方法

用途:用于支原體的分離培養(yǎng),。

支原體簡介

支原體結構簡單,，缺乏細胞壁，僅有質膜,，胞體內(nèi)有核蛋白體以及一個由環(huán)形雙鏈DNA分子組成的原核,。大小僅有0.1~0.3μm，最小直徑約為100毫微米,，可通過濾菌器,，會干擾細胞培養(yǎng)等工作的進行。由于能形成絲狀與分枝形狀,，故稱為支原體,。

不同支原體利用的能源物質不同，如發(fā)酵葡萄糖的肺炎支原體,、人型支原體等,，水解精氨酸的口腔支原體等，還有利用尿素作為能源的解脲支原體,?？衫冒l(fā)酵葡萄糖、水解精氨酸,、水解尿素等生化反應鑒別支原體,。

支原體營養(yǎng)要求一般比細菌高，除必須的基礎營養(yǎng)物質外，還需添加10%~20%的動物血清以提供支原體所需的膽固醇,。由于大多數(shù)的支原體兼性厭氧,，有些菌株在活化分離時保持5%~10%二氧化碳環(huán)境生長狀態(tài)更好。解脲支原體在厭氧條件下生長更好,。

支原體無細胞壁,，對滲透壓敏感，對抑制細胞壁合成的抗生素不敏感,，因此可添加青霉素抑制細菌的生長,。由于滲透壓突變會導致支原體破裂死亡，因此培養(yǎng)支原體時,，維持適宜的滲透壓顯得格外重要,。此外，在支原體培養(yǎng)中,，pH也是重要因素,。

肺炎支原體檢驗依據(jù)及培養(yǎng)基原理

支原體檢查法在2020年版《中華人民共和國藥典》中體現(xiàn)，要求使用支原體肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)監(jiān)測肺炎支原體,。具體操作要求為：將肺炎支原體稀釋至10-7~10-9，接種在支原體肉湯培養(yǎng)基中,，每個稀釋度接種3支試管,，置于36℃培養(yǎng)7-14天，觀察培養(yǎng)基變色結果,。肺炎支原體可以發(fā)酵培養(yǎng)基中的葡萄糖,，使培養(yǎng)基的pH值降低，遇指示劑酚紅使培養(yǎng)基變黃,。

豬胃消化粉,、牛肉浸粉、酵母浸粉提供碳氮源,、維生素和生長因子,；葡萄糖為可發(fā)酵的糖類；氯化鈉維持滲透壓,；酚紅為指示劑,。

成分（g/L）

豬胃消化物  10.0
牛肉浸粉   5.0
酵母浸粉   5.0
氯化鈉   2.5
葡萄糖   5.0
酚紅   0.02
pH值7.6±0.2  25℃

用法

稱取本品 27.52g,加熱溶解于 800ml  蒸餾水中,121℃高壓滅菌 15 分鐘,冷至室溫,無菌操作加入 滅活小牛血清或馬血清 200ml 和青霉素 80 萬單位,混勻,分裝無菌試管,備用。

支原體肉湯培養(yǎng)肺炎支原體12天的靈敏度

支原體肉湯培養(yǎng)基微生物靈敏度試驗:

按標簽用法制備培養(yǎng)基,，接種以下質控菌株,，放置36±1℃需氧培養(yǎng)7-14天。

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一、YY/T 1682-2019 脲原體/人型支原體培養(yǎng)及藥物敏感檢測試劑盒

適用范圍
本標準適用于基于生化反應變色的脲原體（Ureaplasma spp.）和人型支原體（Mycoplasma hominis）培養(yǎng)及藥敏檢測試劑盒的設計與質量控制[9],。
核心檢測方法
采用基礎肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)支原體,，通過分解尿素和精氨酸產(chǎn)生堿性物質使酚紅指示劑變紅,，結合藥物敏感試驗檢測抗菌劑最小抑菌濃度[9]。
檢出限與定量限
培養(yǎng)基變色靈敏度需達到：脲原體檢測下限≤103 CCU/ml,，人型支原體≤102 CCU/ml[9],。
質控樣品要求
需使用ATCC標準菌株（如肺炎支原體ATCC 15531）進行培養(yǎng)基靈敏度驗證，每批次培養(yǎng)基需檢測變色單位[9],。
關鍵實驗步驟
1. 標本接種：無菌拭子浸入培養(yǎng)基后旋轉擠壓
2. 37℃培養(yǎng)24-48小時觀察變色反應
3. 藥敏測試孔加入含菌培養(yǎng)基后礦物油封蓋[9]
特別說明
培養(yǎng)基需含馬血清,、酵母提取物及混合抗生素，pH值變化范圍控制在±0.2,，滅菌后需進行變色單位試驗法驗證靈敏度[9],。

二、中國藥典三部 通則3301 支原體檢查法

適用范圍
適用于生物制品主細胞庫,、病毒種子批及臨床治療用細胞的支原體檢出,，明確病毒類疫苗原液必須采用本方法檢測[5]。
核心檢測方法
采用雙相培養(yǎng)法：液體培養(yǎng)基觀察變色反應,，半流體培養(yǎng)基觀察"荷包蛋"狀菌落,，同時進行DNA熒光染色驗證[5]。
檢出限與定量限
培養(yǎng)基需達到：肺炎支原體檢測下限10-7~10-9稀釋度,，口腔支原體10-3~10-5稀釋度[5],。
質控樣品要求
每批次培養(yǎng)基需用國家檢定機構分發(fā)的ATCC 15531和ATCC 23714標準菌株進行靈敏度驗證，盲傳三代后檢測變色單位[5],。
關鍵實驗步驟
1. 豬胃消化液與牛肉浸液按1:1配比
2. 121℃高壓滅菌15分鐘后添加小牛血清
3. 需氧/厭氧雙環(huán)境培養(yǎng)觀察14天[5]
特別說明
允許使用等效培養(yǎng)基替代，但替代培養(yǎng)基必須通過變色單位試驗法驗證,，且瓊脂培養(yǎng)基需保持13-15g/L的濃度[5],。

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