pRSETA
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肺炎支原體脫氧核糖核酸 (MP DNA)液體室內(nèi)質(zhì)控品
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大腸桿菌（O157：H7）核酸參考品（熱滅活）（強(qiáng)陽性）
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產(chǎn)品中文名稱：pRSETA
產(chǎn)品英文名稱：pRSETA
參考用途：主要用于大腸桿菌蛋白表達(dá)
形態(tài)特性：/
培養(yǎng)基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
培養(yǎng)條件：LB +氨芐青霉素，37℃（克隆菌株DH5a）
培養(yǎng)方法：1.溶解： 收到質(zhì)粒干粉后，請加入 20μl 無菌水至管底，溶解質(zhì)粒，室溫靜置 1min； 2.混合（吸附質(zhì)粒）： 200μl 感受態(tài)細(xì)胞 + 質(zhì)粒 DNA 5~10µl 混勻，冰上放置 30min； 3.熱激導(dǎo)入： 42℃靜置 90s； 4.收縮膜孔： 冰浴 2min； 5.修復(fù)培養(yǎng)： 毎管加 800µl LB 液體培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng) 1h 150 r/min； 6.篩選培養(yǎng)： 將適當(dāng)體積（100 µl）的復(fù)蘇細(xì)胞，涂布在相應(yīng)抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（瓊脂面務(wù)必干燥后）， 倒置培養(yǎng) 12-16h，出現(xiàn)菌落。 7.提取： 挑取單克隆菌落至相應(yīng)抗性 LB 液體培養(yǎng)基中，震蕩培養(yǎng) 12-16h，根據(jù)試驗需要提取質(zhì)粒。
存儲形式：2-8℃
提供形式：質(zhì)粒干粉
備注：pRSET A載體是從pUC的載體衍生而來，載體設(shè)計的目的是為了在大腸桿菌中高水平的表達(dá)和純化目的克隆基因。載體上的T7啟動子使得pRSETA載體高水平表達(dá)克隆的基因序列成為可能。此外，DNA插入片段的位于載體上面的下游側(cè)，并能夠上游的蛋白編碼框相一致，上游的編碼序列表達(dá)了一個N-端融合的肽。該序列包括一個ATG翻譯起始密碼子，一個6 X His標(biāo)簽，一個來源于噬菌體T7基因10的轉(zhuǎn)錄穩(wěn)定序列，Xpress抗原表位，以及一個腸激酶裂解識別序列。His 標(biāo)簽允許簡單的Ni柱蛋白純化。腸激酶識別位點(diǎn)位于His標(biāo)簽和重組蛋白之間，可以隨后方便的去除重組蛋白的N-端的融合肽。
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手機(jī)版：pRSETA
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