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支原體肉湯培養(yǎng)基/用于培養(yǎng)支原體的基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含葡萄糖,、酚紅；不含精氨酸）

HB7025-2

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操作視頻 | 肺炎支原體的靈敏度試驗(yàn)方法

用途:用于支原體的分離培養(yǎng),。

添加劑：每瓶支原體肉湯培養(yǎng)基需配套2盒HB7025-2a青霉素溶液（80萬(wàn)IU）,。每1000ml支原體肉湯培養(yǎng)基溶液中添加1支HB7025-2a青霉素溶液（80萬(wàn)IU）。

支原體簡(jiǎn)介

支原體結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,，缺乏細(xì)胞壁,，僅有質(zhì)膜，胞體內(nèi)有核蛋白體以及一個(gè)由環(huán)形雙鏈DNA分子組成的原核,。大小僅有0.1~0.3μm,，最小直徑約為100毫微米，可通過(guò)濾菌器,，會(huì)干擾細(xì)胞培養(yǎng)等工作的進(jìn)行,。由于能形成絲狀與分枝形狀，故稱為支原體,。

不同支原體利用的能源物質(zhì)不同,，如發(fā)酵葡萄糖的肺炎支原體、人型支原體等,，水解精氨酸的口腔支原體等,，還有利用尿素作為能源的解脲支原體,?？衫冒l(fā)酵葡萄糖、水解精氨酸,、水解尿素等生化反應(yīng)鑒別支原體,。

支原體營(yíng)養(yǎng)要求一般比細(xì)菌高，除必須的基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,，還需添加10%~20%的動(dòng)物血清以提供支原體所需的膽固醇,。由于大多數(shù)的支原體兼性厭氧，有些菌株在活化分離時(shí)保持5%~10%二氧化碳環(huán)境生長(zhǎng)狀態(tài)更好,。解脲支原體在厭氧條件下生長(zhǎng)更好,。

支原體無(wú)細(xì)胞壁，對(duì)滲透壓敏感,，對(duì)抑制細(xì)胞壁合成的抗生素不敏感,，因此可添加青霉素抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。由于滲透壓突變會(huì)導(dǎo)致支原體破裂死亡,，因此培養(yǎng)支原體時(shí),，維持適宜的滲透壓顯得格外重要,。此外，在支原體培養(yǎng)中,，pH也是重要因素,。

肺炎支原體檢驗(yàn)依據(jù)及培養(yǎng)基原理

支原體檢查法在2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》中體現(xiàn)，要求使用支原體肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)監(jiān)測(cè)肺炎支原體,。具體操作要求為：將肺炎支原體稀釋至10^-7~10^-9,，接種在支原體肉湯培養(yǎng)基中，每個(gè)稀釋度接種3支試管,，置于36℃培養(yǎng)7-14天,，觀察培養(yǎng)基變色結(jié)果。肺炎支原體可以發(fā)酵培養(yǎng)基中的葡萄糖,，使培養(yǎng)基的pH值降低,，遇指示劑酚紅使培養(yǎng)基變黃。

豬胃消化粉,、牛肉浸粉,、酵母浸粉提供碳氮源、維生素和生長(zhǎng)因子,；葡萄糖為可發(fā)酵的糖類,；氯化鈉維持滲透壓；酚紅為指示劑,。

成分（g/L）

豬胃消化物	10.0
牛肉浸粉	5.0
酵母浸粉	5.0
氯化鈉	2.5
葡萄糖	5.0
酚紅	0.02
pH值7.6±0.2	25℃

用法

稱取本品27.52g,，加熱溶解于800ml蒸餾水中，121℃高壓滅菌15分鐘,，冷至室溫,，無(wú)菌操作加入滅活小牛血清或馬血清200ml和青霉素80萬(wàn)單位，混勻,，分裝無(wú)菌試管,，備用。

支原體肉湯培養(yǎng)肺炎支原體12天的靈敏度

支原體肉湯培養(yǎng)肺炎支原體12天的靈敏度

支原體肉湯培養(yǎng)基微生物靈敏度試驗(yàn):

按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,，接種以下質(zhì)控菌株,，放置36±1℃需氧培養(yǎng)7-14天。

以上信息僅供參考,，請(qǐng)以實(shí)物批次為準(zhǔn),！

一、適用范圍

適用于主細(xì)胞庫(kù),、工作細(xì)胞庫(kù),、病毒種子批、對(duì)照細(xì)胞及臨床治療用細(xì)胞的支原體檢測(cè),，覆蓋肺炎支原體,、口腔支原體等可培養(yǎng)支原體類型[1][2][3],。

二、核心檢測(cè)方法

1. 基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方：豬胃消化液500ml,，牛肉浸液（1:2）500ml,，葡萄糖5.0g，酵母浸粉5.0g,，氯化鈉2.5g,，酚紅0.02g，pH值7.6±0.2
2. 滅菌條件：121℃高壓滅菌15分鐘
3. 血清添加：需加入10%-20%人或動(dòng)物血清提供膽固醇[1][2][3]

三,、檢出限與定量限

肺炎支原體檢測(cè)限：稀釋至10??~10??濃度可檢出
口腔支原體檢測(cè)限：稀釋至10?3~10??濃度可檢出
定量要求：每個(gè)稀釋度需接種3支平行管[2][3]

四,、質(zhì)控樣品要求

1. 標(biāo)準(zhǔn)菌株：肺炎支原體（ATCC 15531）、口腔支原體（ATCC 23714）
2. 質(zhì)控頻次：每批次培養(yǎng)基需進(jìn)行靈敏度驗(yàn)證
3. 傳代要求：菌種需經(jīng)36℃盲傳兩代活化[2][3]

五,、關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)步驟

1. 培養(yǎng)基配制：精確稱量各組分,，pH調(diào)節(jié)需使用精密試紙或pH計(jì)校準(zhǔn)
2. 接種操作：供試品接種量不超過(guò)培養(yǎng)基體積的10%
3. 培養(yǎng)觀察：36℃±1℃培養(yǎng)21天，前7天每日觀察顏色變化[1][3]

六,、特別說(shuō)明

1. 營(yíng)養(yǎng)需求差異：不同支原體對(duì)精氨酸/葡萄糖代謝需求不同,，需選擇對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基
2. 血清替代方案：在特殊情況下可選用膽固醇-脂肪酸復(fù)合物替代動(dòng)物血清
3. 結(jié)果判讀：培養(yǎng)基顏色由黃變紅為陽(yáng)性，需排除非特異性變色干擾[1][3]

[1] 支原體檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)——培養(yǎng)法和指示細(xì)胞培養(yǎng)法 [2] 藥典三部-通則-3301支原體檢查法 [3] 3301 支原體檢查法

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