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硝酸鹽肉湯（還原）（軍團菌）/用于軍團菌檢測（SN047-1）

SN047-1

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20支/盒

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硝酸鹽肉湯（還原）（軍團菌）介紹：

用途：用于軍團菌檢測

添加劑：每盒需配套添加1盒HB8282 硝酸鹽還原試劑使用

硝酸鹽還原試驗原理：

硝酸鹽培養(yǎng)基中的硝酸鹽可被某些細菌還原為亞硝酸鹽,，加入對氨基苯磺酸和α-萘胺試劑，可與亞硝酸鹽反應,，產(chǎn)生一種紅色重氮化合物而呈陽性,；硝酸鹽還原的最終產(chǎn)物也因細菌種類不同二不同，包括亞硝酸鹽,、氨,、分子氮和一氧化碳等。若加入對氨基苯磺酸和α-萘胺試劑后不變色,，再加入少許鋅粉,，如果變紅，說明培養(yǎng)基中的硝酸鹽未被細菌還原而仍然存在,，被鋅粉還原為亞硝酸鹽后與對氨基苯磺酸和α-萘胺試劑反應顯紅色,，則判定為硝酸鹽還原陰性；如果加入鋅粉后仍然不變紅,，說明培養(yǎng)基中的硝酸鹽已被還原成亞硝酸鹽,，進而分解成氨、氮等產(chǎn)物,，判定為硝酸鹽還原陽性,。

結(jié)果判斷：

?編號

?產(chǎn)品名稱

?結(jié)果判斷

?培養(yǎng)時間?

備注?

?陽性

陰性?

SN047-1

硝酸鹽肉湯

?滴加試劑變紅，

或滴加試劑不變紅,，

繼續(xù)加入鋅粉仍不變紅

滴加試劑不變紅,，

繼續(xù)加入鋅粉后變紅

24-120

培養(yǎng)結(jié)束后需滴加硝酸鹽還原試劑甲液和乙液各

2-3滴,，立即觀察結(jié)果，若變紅,，則為陽性,；

若不變色，繼續(xù)加入少量鋅粉,，如仍不變紅,，

則也為陽性，如變紅,，則為陰性,。?

不同細菌在硝酸鹽肉湯上的生化反應現(xiàn)象：

a:博茲曼軍團菌，b:大腸埃希氏菌,，c:空白

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產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品說明及用途
HBPM030-1	BCYE（不含L-半胱氨酸鹽酸鹽）平板9cm（2-8℃）	9cm*10	用于軍團菌的培養(yǎng)
HB8496	GVPC瓊脂基礎GVPC Agar Base	100g	用于軍團菌的選擇性分離培養(yǎng)(ISO標準)
HB8493	BCYE瓊脂基礎BCYE Agar Base	100g	用于軍團菌的選擇性分離培養(yǎng)(ISO標準)
HB8496a	GVPC添加劑	5支/套	每套添加于100mlGVPC瓊脂中
HB8493-1	BCYE-CYS瓊脂基礎BCYE-Cys Agar Base	100g	用于軍團菌的選擇性分離培養(yǎng)(ISO標準)
HB8493a	L-半胱氨酸鹽酸鹽（凍干粉）L- Cysteine hydrochloride	0.04g*5支/盒	每支添加于100ml HB8493 BCYE瓊脂基礎或99ml HB8580 產(chǎn)H₂S菌培養(yǎng)基中
HB8493b	可溶性焦磷酸鐵Of soluble iron pyrophosphate	0.025/支*5	每支添加于100mlHB8493或100mlHB8493-1中
HB8485	硝酸鐵瓊脂Ferric nitrate agar	250g	用于軍團菌的選擇性分離培養(yǎng)(ISO標準)
HBPM031	GVPC瓊脂平板（9cm）GVPC Agar Plate	9cm*10個/包	用于軍團菌的選擇性分離培養(yǎng)
HB8496-1	采樣吸收液1-GVPC液體培養(yǎng)基GVPC Liquid Medium	100g	用于空調(diào)系統(tǒng)軍團菌采樣時吸收液
HB8496-1a	采樣吸收液1-GVPC液體培養(yǎng)基添加劑	1ml*3支/管	每套加入100ml采樣吸取液1-GVPC液體培養(yǎng)基中
GB124-1	馬尿酸鈉（軍團菌）	20支/盒	用于軍團菌檢測
SN009-1	尿素酶生化管（軍團菌）	20支	用于軍團菌檢測
SN039-1	明膠液化生化管（軍團菌）	20支/盒	用于軍團菌檢測
SN017-1	麥芽糖發(fā)酵管（軍團菌）	20支	用于軍團菌檢測
SN092	葡萄糖發(fā)酵管(軍團菌)	20支	用于軍團菌檢測
SN091	乳糖發(fā)酵管（軍團菌）	20支	用于軍團菌檢測
HBPT001-6	軍團菌菌種保存管（1ml）Legionella culture preservation tube	1ml*50支/盒	用于軍團菌的保存
HBPM030	BCYE瓊脂平板(9cm)BCYE Agar Base	10個/包	用于軍團菌的選擇性分離培養(yǎng)

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一,、適用范圍

本標準（GB/T 40392-2021）適用于循環(huán)冷卻水系統(tǒng)中軍團菌的檢測,，包括冷卻塔、熱交換器等設備中的水質(zhì)監(jiān)測,。檢測對象涵蓋人工水體環(huán)境中的嗜肺軍團菌及其他常見致病菌種[1][4][8],。

二、核心檢測方法

主要采用膜過濾結(jié)合選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)法,，包括樣本預處理（離心或靜置去除雜質(zhì)）,、膜富集、BCYE瓊脂平板培養(yǎng)及菌落形態(tài)觀察,。培養(yǎng)溫度需控制在36±1℃,，培養(yǎng)周期為3-10天[1][4][7]。

三,、檢出限與定量限

檢出限為10 CFU/L,，定量限通過膜過濾法可達50 CFU/L。需通過系列稀釋法確認有效計數(shù)范圍,，避免高濃度樣本導致的菌落重疊[4][8],。

四、質(zhì)控樣品要求

需使用BCYE（緩沖活性炭酵母提取物）培養(yǎng)基作為基礎培養(yǎng)基,，每批次實驗應包含陽性對照（嗜肺軍團菌標準菌株）和陰性對照（無菌水）,。培養(yǎng)環(huán)境需保持2%-5% CO?濃度以促進菌落生長[7][8]。

五,、關鍵實驗步驟

1. 樣本預處理：1000 r/min離心1分鐘去除懸浮物
2. 膜過濾：使用0.45μm孔徑濾膜富集微生物
3. 選擇性培養(yǎng)：BCYE瓊脂平板36℃培養(yǎng)
4. 菌落鑒定：通過氧化酶試驗,、蘇丹黑染色等生化反應驗證[1][4][8]

六、特別說明

1. 與ISO 11731:2017存在方法差異,，需注意培養(yǎng)基配方差異
2. 樣本運輸需在4℃保存且不超過24小時
3. 實驗室需達到生物安全二級防護標準
4. 陽性結(jié)果需結(jié)合臨床特征進行流行病學判斷[1][8]

[1] GB/T 40392-2021循環(huán)冷卻水中軍團菌的檢測 [4] GBT40392-2021 循環(huán)冷卻水中軍團菌的檢測 (2).pdf [7] 軍團菌屬檢驗標準操作規(guī)程 [8] GB∕T 40392-2021 循環(huán)冷卻水中軍團菌的檢測（正式版）

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