硝酸鹽還原試劑盒/用于硝酸鹽還原試驗(yàn)
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2216E海水瓊脂即用型平板
BNCC353703 | 見詳情
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酵母浸粉
BNCC385214 | 見詳情
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胰蛋白胨
BNCC385213 | 見詳情
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DSMZ231培養(yǎng)基
BNCC385128 | 見詳情
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含20%蔗糖的麥芽即用型平板
BNCC380934 | 見詳情
試劑盒組成:
組成
別名
規(guī)格
配制依據(jù)
溶液A
對(duì)甲基苯磺酸溶液
5ml*2
在1000mL 5mol/L乙酸中溶解8g對(duì)氨基苯磺酸
溶液B
α-萘酚乙酸溶液
5ml*2
在1000mL 5mol/L乙酸中溶解5g α-萘酚
反應(yīng)原理:
蛋白胨和牛肉粉提供碳源、氮源、維生素和生長因子;某些細(xì)菌可利用硝酸鹽產(chǎn)亞硝酸鹽、氨或氮?dú)狻5渭酉跛猁}還原試劑后若試驗(yàn)菌培養(yǎng)物中有亞硝酸鹽,可與乙酸、對(duì)苯氨基苯磺酸和α-萘酚反應(yīng)生成紅色的N-α-苯胺偶氮苯磺酸。若試驗(yàn)菌可利用硝酸鹽產(chǎn)亞硝酸鹽進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為氮?dú)猓瑒t小倒管中會(huì)有氣體囤積,判定為陽性。若試驗(yàn)菌可將亞硝酸鹽轉(zhuǎn)化為氨,則滴加硝酸鹽還原試劑呈無色反應(yīng),此時(shí)需加入適量鋅粉證明培養(yǎng)物中是否有未被利用的硝酸鹽存在,若加入鋅粉后為無色則證明無硝酸鹽,則可判斷為陽性。試驗(yàn)菌不利用硝酸鹽,滴加硝酸鹽還原試劑后為無色,加入鋅粉后變?yōu)榧t色,證明培養(yǎng)物中有未被利用的硝酸鹽被鋅粉還原為亞硝酸鹽產(chǎn)生紅色反應(yīng),此時(shí)判斷為陰性。
操作步驟:
1.培養(yǎng)物接種于硝酸鹽肉湯,36±1℃培養(yǎng)1-5天。
2.加入溶液A和溶液B各2-3滴,混勻。
3.立即觀察結(jié)果,也可以放置室溫2-5分鐘觀察結(jié)果。
結(jié)果判斷:
陽性反應(yīng):紅色。
陰性反應(yīng):不變色(無紅色出現(xiàn))
注:如出現(xiàn)陰性結(jié)果,可再加入鋅粉少許,若出現(xiàn)紅色,則鑒定為陰性結(jié)果,若不變色則為陽性結(jié)果。
硝酸鹽還原試劑盒微生物靈敏度試驗(yàn):
按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,接種以下質(zhì)控菌株,放置/℃/培養(yǎng)/小時(shí)。
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2. 加樣:依次加入待測(cè)樣本、酶標(biāo)抗體;
3. 孵育:37℃避光反應(yīng)60分鐘;
4. 洗滌:去除未結(jié)合物質(zhì);
5. 顯色:加入TMB底液,終止反應(yīng)后讀取OD值[1]。
2. 顯色時(shí)間需嚴(yán)格控制,終止后10分鐘內(nèi)完成讀數(shù);
3. 高濃度樣本需預(yù)稀釋,避免鉤狀效應(yīng)[1]。
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