GB29694-2013動物性食品中磺胺間甲氧嘧啶的測定應(yīng)用

來源與性質(zhì)：磺胺間甲氧嘧啶是磺胺藥中抗菌作用最強(qiáng)的藥物之一，化學(xué)式C11H12N4O3S。外觀為白色或類白色的結(jié)晶性粉末，無臭、幾乎無味，遇光色漸變暗。本品在丙酮中略溶，在乙醇中微溶，在水中不溶，在稀鹽酸或氫氧化鈉溶液中易溶。

應(yīng)用領(lǐng)域：磺胺類藥物為人工合成的抗菌藥。磺胺類藥物作為廣譜抗菌藥已有70年的歷史，至今已合成10000多種磺胺類衍生物，其中40多種應(yīng)用于人體和獸藥。除了治療敏感菌所致傳染病，傳染性腦膜炎、痢疾、弓形體病等之外，也常用于禽類的球蟲病、白冠病、鼻炎類疾病；豬的弓形體、鏈球菌、附紅細(xì)胞體等常見疾病的治療。磺胺類藥物具有抗菌面廣，藥效穩(wěn)定，價格不貴等特點(diǎn)，作為獸藥被頻繁使用，甚至作為飼料添加劑用來促生長或增產(chǎn)。人在食用含殘留的磺胺類藥物家禽時，可能引起過敏反應(yīng)，耐藥性，膽紅素病發(fā)病率的增加，乳兒粒細(xì)胞減少及溶血性貧血癥等，長效磺胺類藥物還可引起變形血紅蛋白癥，磺胺類藥物對人體可能還會產(chǎn)生致畸、致癌作用。農(nóng)業(yè)部將把畜產(chǎn)品磺胺類獸藥殘留作為重點(diǎn)監(jiān)控目標(biāo)。

《GB 29694-2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 動物性食品中13種磺胺類藥物多殘留的測定 高效液相色譜法》于2013年9月6日發(fā)布，2014年1月1日實(shí)施，試料中殘留的磺胺類藥物，用乙酸乙酯提取，0.1 mol/L 鹽酸溶液轉(zhuǎn)換溶劑，正己烷除脂，MCX柱凈化，高效液相色譜-紫外檢測法測定，外標(biāo)法定量。

曼哈格參考《GB 29694-2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 動物性食品中13種磺胺類藥物多殘留的測定 高效液相色譜法》，重現(xiàn)了國標(biāo)豬肉中磺胺間甲氧嘧啶的檢測方法，采用Bepure25692-25mg豬肉磺胺間甲氧嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品，BESEP SPE COLUMN P-SCX (MCX) 固相萃取柱凈化樣品，C18色譜柱分離，高效液相色譜儀檢測，外標(biāo)法定量。

一、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

純品：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/磺胺間甲氧嘧啶

貨號：BePure-25692

二、前處理萃取柱

混合型強(qiáng)陽離子交換反相柱：BESEP SPE COLUMN P-SCX(MCX) 60mg 3ml 50pk

貨號：77715

1標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：100 μg/mL磺胺間甲氧嘧啶

混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液：精密稱取磺胺間甲氧嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品各(Bepure25692-25mg)10 mg，于100 mL 量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為100μg/mL 的磺胺類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液。

10μg/mL磺胺間甲氧嘧啶混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：精密量取100 μg/mL磺胺間甲氧嘧啶混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液5.0 mL，于50 mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，配制成濃度為10 μg/mL的磺胺類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。 -20℃以下保存，有效期6個月。

精密量取10 μg/mL 磺胺間甲氧嘧啶混合標(biāo)準(zhǔn)工作液適量，用0.1%甲酸乙腈溶液稀釋，配制成濃度為 10、50、100、250、500、2500和5000 μg/L 的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，供高效液相色譜測定。

2 提取

稱取試料4 g±0.05 g,于50 mL 聚四氟乙烯離心管中，加乙酸乙酯20 mL, 渦動2 min,4000 r/min 離心5 min, 取上清液于100 mL 雞心瓶中，殘渣中加乙酸乙酯20 mL, 重復(fù)提取一次，合并兩次提取液。

雞心瓶中加0.1 mol/L 鹽酸溶液4 mL，于40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至少于3 mL, 轉(zhuǎn)至10 mL離心管中。用0.1 mol/L 鹽酸溶液2 mL 洗雞心瓶，轉(zhuǎn)至同一離心管中。再用正己烷3 mL 洗雞心瓶，將正己 烷轉(zhuǎn)至同一離心管中，渦旋混合30s,3000 r/min離心5 min,棄正己烷。再次用正己烷3 mL洗雞心瓶，轉(zhuǎn)全同一離心管中，渦旋混合30 s,3000 r/min離心5 min,棄正己烷，取下層液備用。

3凈化

BESEP SPE COLUMN P-SAX(MAX) 60mg 3ml 50pk

三、儀器檢測方法

色譜柱:C18 250mm*4.6mm*5μm

流動相：0.1%甲酸+乙腈，梯度洗脫見表1

進(jìn)樣量:100 μL

柱溫:40℃

檢測波長:270 nm

流速：1mL/min

表 1 流動相梯度洗脫條件

四、 檢測結(jié)果

五、譜圖

磺胺間甲氧嘧啶標(biāo)準(zhǔn)溶液（500ng/mL）液相色譜圖

豬肉中磺胺間甲氧嘧啶液相色譜圖

磺胺間甲氧嘧啶標(biāo)準(zhǔn)曲線圖(R2 =1.0000，截距：0.0327，斜率0.0067)

六、實(shí)驗(yàn)注意事項

前處理實(shí)驗(yàn)過程中加入正己烷除脂，極其容易乳化，可用手輕輕振搖即可。

相關(guān)產(chǎn)品訂購信息

標(biāo)準(zhǔn)品