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創(chuàng)傷弧菌/分類學(xué)研究，質(zhì)量控制

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分類學(xué)研究,，質(zhì)量控制,。

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GB 4789.44-2020 標(biāo)準(zhǔn)解讀

適用范圍	本標(biāo)準(zhǔn)適用于魚,、蝦、蟹,、貝類等水產(chǎn)品中創(chuàng)傷弧菌的檢驗(yàn),，涵蓋樣品處理、分離培養(yǎng)及分子生物學(xué)鑒定等環(huán)節(jié)[1],。

核心檢測方法

包括選擇性增菌培養(yǎng)（堿性蛋白胨水）、分離培養(yǎng)（TCBS瓊脂）,、生化鑒定及PCR檢測（針對(duì)毒力基因如vvhA）[1],。

檢出限與定量限

方法檢出限為1 CFU/g（25g樣品增菌后檢測），定量限需結(jié)合稀釋梯度和平板計(jì)數(shù)法確定[1],。

質(zhì)控樣品要求

需使用標(biāo)準(zhǔn)菌株（如ATCC 27562）作為陽性對(duì)照,，陰性對(duì)照采用無菌生理鹽水，每批次實(shí)驗(yàn)需包含質(zhì)控樣品[1],。

關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)步驟

1. 樣品預(yù)處理：25g樣品與225mL堿性蛋白胨水均質(zhì),，36℃±1℃增菌6-8小時(shí)；
2. 分離培養(yǎng)：劃線接種TCBS瓊脂,，36℃培養(yǎng)18-24小時(shí),；
3. 可疑菌落（藍(lán)綠色）進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)和嗜鹽性試驗(yàn)；
4. PCR擴(kuò)增vvhA基因,，電泳確認(rèn)目標(biāo)條帶（約519bp）[1],。

特別說明	1. 樣品需在2-5℃保存且24小時(shí)內(nèi)處理,，避免冷凍導(dǎo)致細(xì)菌死亡； 2. 增菌時(shí)間超過8小時(shí)可能導(dǎo)致競爭菌過度生長,； 3. PCR檢測需在獨(dú)立區(qū)域操作,，防止氣溶膠污染[1]。

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