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擬態(tài)弧菌/研究,、質(zhì)量控制

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研究,、質(zhì)量控制。

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適用范圍

適用于水產(chǎn)品中副溶血性弧菌、霍亂弧菌,、創(chuàng)傷弧菌,、溶藻弧菌,、擬態(tài)弧菌5種致病性弧菌的快速檢測[1],。

核心檢測方法

采用多重PCR-變性高效液相色譜法（MPCR-DHPLC），通過特異性引物擴增目標基因片段,，結(jié)合DHPLC技術(shù)分離和鑒定擴增產(chǎn)物[1],。

檢出限與定量限

方法檢出限為10 CFU/g（水產(chǎn)品樣本），定量限通過標準曲線法確定,，需結(jié)合實驗室驗證數(shù)據(jù)[1],。

質(zhì)控樣品要求

實驗需包含陰性對照（無菌水）、陽性對照（標準菌株）及空白對照,，確保檢測系統(tǒng)無污染[1],。

關(guān)鍵實驗步驟

1. 樣品預(yù)處理：25g樣品與225mL無菌生理鹽水均質(zhì)
2. DNA提取：使用酚-氯仿法或商業(yè)化試劑盒
3. MPCR擴增：5種弧菌特異性引物同步擴增
4. DHPLC分析：色譜柱分離擴增產(chǎn)物,，通過保留時間判定目標菌[1]

特別說明

實驗需符合GB 19489生物安全要求,，DHPLC流動相含TEAA緩沖液,，需嚴格控制色譜柱溫度（50±0.5℃）[1]。

[1] SN/T2564—2010水產(chǎn)品中致病性弧菌檢測MPCR-DHPLC法

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