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單核增生李斯特氏菌（GB 4789.28）

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《GB 4789.28 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》標(biāo)準(zhǔn)菌株

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GB 4789.30-2016 標(biāo)準(zhǔn)解讀

適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的檢驗(yàn)方法,，分為三法：
1. 第一法：適用于食品中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的定性檢驗(yàn)；
2. 第二法：適用于單核細(xì)胞增生李斯特氏菌含量較高食品的計(jì)數(shù),；
3. 第三法：適用于單核細(xì)胞增生李斯特氏菌含量較低（<100 CFU/g）且雜菌含量高的食品（如牛奶,、含顆粒物質(zhì)食品）的計(jì)數(shù)。

核心檢測(cè)方法

1. 增菌法（LB1/LB2增菌液）：通過(guò)選擇性培養(yǎng)基抑制非目標(biāo)菌；
2. 分離培養(yǎng)：使用李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基和PALCAM瓊脂篩選典型菌落,；
3. 生化鑒定：通過(guò)溶血試驗(yàn),、動(dòng)力觀察及全自動(dòng)微生物生化系統(tǒng)確認(rèn)目標(biāo)菌。

檢出限與定量限

1. 定性檢驗(yàn)（第一法）：檢出限為25g/mL樣品中是否存在目標(biāo)菌,；
2. 定量檢驗(yàn)（第二法,、第三法）：檢出限為1 CFU/g，定量限根據(jù)樣品稀釋梯度確定（如第三法適用于<100 CFU/g的樣品）,。

質(zhì)控樣品要求

1. 需使用標(biāo)準(zhǔn)菌株（如單核細(xì)胞增生李斯特氏菌ATCC19111或CMCC54004）進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照；
2. 陰性對(duì)照需包含非目標(biāo)菌（如英諾克李斯特氏菌,、伊氏李斯特氏菌）,；
3. 每批次實(shí)驗(yàn)需同步進(jìn)行空白對(duì)照及培養(yǎng)基性能驗(yàn)證。

關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)步驟

1. 樣品前處理：25g樣品與225mL LB1增菌液均質(zhì),，30℃培養(yǎng)24h,；
2. 選擇性增菌：轉(zhuǎn)種至LB2增菌液，30℃培養(yǎng)18-24h,；
3. 分離培養(yǎng)：劃線接種顯色培養(yǎng)基和PALCAM瓊脂,，36℃培養(yǎng)24-48h；
4. 確證試驗(yàn)：挑取典型菌落進(jìn)行溶血試驗(yàn),、動(dòng)力試驗(yàn)及生化鑒定,。

特別說(shuō)明

1. 第二法不適用于高背景雜菌干擾的樣品；
2. 第三法需注意離心步驟（3000r/min離心10min）以提高低濃度樣品的檢出率,；
3. 溶血試驗(yàn)需使用綿羊血瓊脂,，單核細(xì)胞增生李斯特氏菌呈現(xiàn)狹窄β-溶血環(huán)。

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