綠膿菌素測(cè)定培養(yǎng)基(PDP)/用于綠膿桿菌的綠膿菌素測(cè)定試驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))
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用途:用于綠膿桿菌的綠膿菌素測(cè)定試驗(yàn)。
成分(g/L)
檢驗(yàn)原理:
蛋白胨和甘油提供碳氮源;氯化鎂和硫酸鉀促進(jìn)綠膿色素和熒光素的產(chǎn)生,;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
用法:
稱取本品49.4g,另稱取10g甘油,加熱煮沸完全溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅菌 15 分鐘,備用,。
注:甘油需用戶自備
注:培養(yǎng)基中含少量氯化鎂,,滅菌后可能出現(xiàn)微量沉淀。
綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)基(PDP)中細(xì)菌的生長(zhǎng)情況:
綠膿菌素生成試驗(yàn)方法及原理:
方法:挑取可疑菌落接種在在綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)基(PDP)斜面上,,培養(yǎng)24小時(shí),,觀察斜面有無色素。如有色素,,在試管內(nèi)加氯仿3.0~5.0mL,,充分震搖,使培養(yǎng)物中的綠膿菌素提取在氯仿中,,待氯仿提取液呈現(xiàn)綠色時(shí),,加1mol/L鹽酸約1mL,震搖后靜置片刻,,上層鹽酸溶液中呈現(xiàn)粉紅至紅色實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性,,否則為陰性。
原理:銅綠假單胞菌能產(chǎn)生的綠膿菌素能被氯仿提取,,且在水中溶解度比氯仿大,,并且會(huì)發(fā)生可逆的氧化還原反應(yīng),氧化時(shí)堿性呈藍(lán)色,,酸性呈紅色,。所以加入鹽酸溶液并震搖后,綠膿菌素會(huì)由氯仿轉(zhuǎn)移至鹽酸溶液中,,并在酸性環(huán)境中呈紅色,。
綠膿菌素測(cè)定培養(yǎng)基(PDP)微生物靈敏度試驗(yàn):
按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,,接種以下質(zhì)控菌株,放置36±1℃需氧培養(yǎng)24±2小時(shí),。
以上信息僅供參考,,請(qǐng)以實(shí)物批次為準(zhǔn)!
一,、適用范圍
二,、核心檢測(cè)方法
2. 分離培養(yǎng):劃線接種于PDP瓊脂斜面,37℃培養(yǎng)24小時(shí),。
3. 綠膿菌素提取:加入三氯甲烷萃取色素,,與鹽酸反應(yīng)顯色判定結(jié)果[8][9]。
三,、檢出限與定量限
四、質(zhì)控樣品要求
2. 陰性對(duì)照:未接種的PDP培養(yǎng)基,試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)無色素反應(yīng)[6][8],。
五,、關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)步驟
2. 樣品處理:按標(biāo)準(zhǔn)增菌后劃線接種。
3. 顯色判定:三氯甲烷萃取液加鹽酸呈粉紅色為陽性[6][8][9],。
六,、特別說明
2. 操作防護(hù):稱量時(shí)需佩戴口罩防粉塵,。
3. 結(jié)果驗(yàn)證:氧化酶試驗(yàn)陽性且革蘭陰性無芽孢桿菌需結(jié)合綠膿菌素試驗(yàn)綜合判定[6][8][9],。
以上信息僅供參考,請(qǐng)以相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的原文為準(zhǔn),!