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R2A瓊脂培養(yǎng)基（中國藥典）/用于純化水中菌落總數(shù)的測定

HB0167-5

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250g

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R2A瓊脂培養(yǎng)基（中國藥典）
BWZ6141-2016 | 10組分
R2A瓊脂培養(yǎng)基（中國藥典）
BWZ6142-2016 | 10組分

R2A瓊脂培養(yǎng)基（中國藥典）介紹：

用途：用于純化水中菌落總數(shù)的測定,，（EP,、USP、Chp標準）

配方：

酵母浸出粉	0.5
蛋白胨	0.5
酪蛋白水解物	0.5
葡萄糖	0.5
可溶性淀粉	0.5
磷酸氫二鉀	0.3
無水硫酸鎂	0.024
丙酮酸鈉	0.3
瓊脂	15.0
pH值7.2 ± 0.2	25℃

用法：稱取本品18.18g,加熱溶解于1000ml純化水中,分裝三角瓶,121℃高壓滅菌15分鐘,備用,。

注：培養(yǎng)基中有少量淀粉和硫酸鎂,，滅菌后可能會有微量沉淀。

檢驗原理：酵母浸出粉,、蛋白胨,、酸蛋白水解物提供氮源、維生素,、生長因子,；葡萄糖,、為可發(fā)酵糖類；可溶性淀粉可以吸收菌在復蘇過程產(chǎn)生的有害物質(zhì),；丙酮酸鈉可增強細菌的復蘇,。磷酸氫二鉀為酸堿緩沖劑；無水硫酸鎂提供二價陽離子,；瓊脂為凝固劑,。

不同藥典關(guān)于純化水的微生物檢測方法和質(zhì)量標準

中國藥典

??? 【檢查】微生物限度取本品不少于 1ml，按薄膜過濾法處理后,，采用 R2A 瓊脂培養(yǎng)基,，30～35℃培養(yǎng)不少于 5 天，依法檢查（通則 1105）,，每1ml 供試品中需氧菌總數(shù)不得過 100cfu,。

操作簡述：

??? 除葡萄糖,、瓊脂外,，取上述成分,，混合,，微溫溶解,，調(diào)節(jié) pH 值使加熱后在 25℃的 pH值為 7.2±0.2，加入瓊脂,，加熱溶化后,，再加入葡萄糖,，搖勻,，分裝,，滅菌,。 R2A 瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查試驗照通則 1105 中“計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查”的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查方法進行，試驗菌株為銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌,。應符合規(guī)定,。

USP標準

??? 在美國藥典中,，推薦使用0.45μm薄膜過濾法,，并同時使用高營養(yǎng)培養(yǎng)基（平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（PCA））于30-35℃培養(yǎng)72小時以上，和低營養(yǎng)培養(yǎng)基（R2A瓊脂）于20-25℃培養(yǎng)96小時以上,。檢測標準為：≤100cfu/ml ,。

操作簡述：（可根據(jù)實際情況調(diào)整）

??? 量取10ml充分混勻的水樣,，以無菌操作加入安裝好的薄膜過濾器內(nèi),，過濾,。并用 pH7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml,共沖洗1次,。過濾后,，取出濾膜，正面朝上貼于瓊脂平板上,。共制備 2張濾膜,，一張濾膜貼于平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基平板（高營養(yǎng)培養(yǎng)基）置30℃~35℃生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)2~3天，計數(shù),。另一張濾膜貼于R2A瓊脂平板（低營養(yǎng)培奍基）,，置20℃~25℃生化培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)5~7天,，計數(shù)。以培養(yǎng)基平板上菌落數(shù)生長較多者作為檢測結(jié)果,，按比例折算為1ml純化水中的微生物數(shù)量后報告,。EP標準

??? 在歐洲藥典中使用薄膜過濾法（0.45μm 孔徑濾膜）,，使用 R2A 瓊脂培養(yǎng)基在 30℃～35℃培養(yǎng) 5 天以上,。質(zhì)量標準：≤100cfu/mL,。

操作簡述：（可根據(jù)實際情況訓整）

??? 量取 10ml 充分混勻的水樣,，以無菌操作加入安裝好的薄膜過濾器內(nèi),，過濾。并用 pH7.0 的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜,每張濾膜每次沖洗量為 100ml，共沖洗 1 次,。過濾后,，取出濾膜,，正面朝上貼于 R2A 瓊脂平板上, 置 30℃～35℃生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng) 5 天,，計數(shù),。按比例折算為 1ml 純化水中的微生物數(shù)量后報告,。

R2A瓊脂微生物質(zhì)控結(jié)果：

大腸埃希氏菌

白色菌落

金黃色葡萄球菌

白色菌落

銅綠假單胞菌

有綠色色素

R2A瓊脂培養(yǎng)基的原理及應用:

R2A瓊脂培養(yǎng)基(中國藥典)微生物靈敏度試驗:

按標簽用法制備培養(yǎng)基,，接種以下質(zhì)控菌株,，放置30-35℃需氧培養(yǎng)48-120小時,。注：回收率計算時，用R2A瓊脂做對照培養(yǎng)基,。?

R2A瓊脂培養(yǎng)基（中國藥典）同名產(chǎn)品推薦：

HBBD0167-5-200 R2A瓊脂袋裝即用型（200ml） 200ml/袋*10

HB0167 R2A瓊脂 250g

HB0167-1 瓊脂培養(yǎng)基S(R2A瓊脂) 250g

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HB0167-4 R2A瓊脂（USP)(R2A Agar) 250g

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HBPM0167-4 R2A瓊脂培養(yǎng)基平板（9cm）（醫(yī)療） 9cm*10個/包

R2A瓊脂培養(yǎng)基（中國藥典）相關(guān)產(chǎn)品：

產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品說明及用途
HB4114-19-3	胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(無菌干粉)Trypticase(Tryptic) Soy Broth	250g	一種通用的營養(yǎng)培養(yǎng)基用于各種微生物的增菌培養(yǎng)
HBPP5190-2	硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基瓶裝（200ml）Thiolglycollate Medium	200ml*20瓶	主要用于藥品或生物制品厭氧菌的培養(yǎng),，也可用于需氧菌的培養(yǎng)
HB0233-12	馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）（中國藥典）Potato Dextrose Agar	250g	用于霉菌,酵母菌計數(shù)（中國藥典）
HBPP5190-250	硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基瓶裝（250ml）Thiolglycollate Medium	250ml*20	主要用于藥品或生物制品厭氧菌的培養(yǎng),，也可用于需氧菌的培養(yǎng)
HB0253-88-100	沙氏葡萄糖瓊脂(SDA)(參比培養(yǎng)基)Sabouraud Dextrose Agar	100g	用于真菌檢測
HBPM5184-31	溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基平板（9cm）(2-25℃)Cetrimide Agar Medium	9cm*10/包	用于綠膿假單胞菌的分離培養(yǎng)
HB4114-19-4	胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(TSB)(植物源)Trypticase(Tryptic) Soy Broth	250g	—種通用的營養(yǎng)培養(yǎng)基,用于各種微生物的增菌培養(yǎng)
HBPP5190-500	硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基瓶裝（500ml）Thiolglycollate Medium	500ml*12瓶	主要用于藥品或生物制品厭氧菌的培養(yǎng),，也可用于需氧菌的培養(yǎng)
HB5191	液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（不含瓊脂）Thiolglycollate Medium	250g	用于混濁制品需氧菌無菌試驗
HBPP5190-300	硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基瓶裝（300ml）Thiolglycollate Medium	300ml*12瓶	主要用于藥品或生物制品厭氧菌的培養(yǎng)，也可用于需氧菌的培養(yǎng)
HBBD0167-5-200	R2A瓊脂袋裝即用型（200ml）	200ml/袋*10	用于純化水中菌落總數(shù)的測定
HBPP4114-100-11	胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(TSB)瓶裝（100ml）	100ml*20瓶	一種通用的營養(yǎng)培養(yǎng)基,，用于各種微生物的培養(yǎng)（螺旋擰蓋口）
HBPP8454-100	PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液瓶裝（100ml）Buffered Sodium Chloride Peptone Solution	100ml*20瓶	用于樣品制備的營養(yǎng)液
HBPT8621-4	含0.5%硫代硫酸鈉和0.1%吐溫80的磷酸鹽緩沖液管（PH7.2）（5ml）	5ml*20支/盒	用于菌落總數(shù),，大腸菌群,，金葡菌，大腸桿菌樣品制備
HB5190-5	硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（中國藥典）Thiolglycollate Medium	250g	用于藥品,、生物制品無菌試驗,，檢測好氧菌和厭氧菌
HB5222	改良馬丁培養(yǎng)基Martin Medium,Modified	250g	用于藥品、生物制品無菌檢測,，檢測霉菌和酵母菌（中國藥典）
HB4701	改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基Martin Agar Medium ,Modified	250g	用于生物制品霉菌無菌檢驗（中國藥典）
HB5200	玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基Rose Bengal Agar Medium	250g	用于霉菌,、酵母菌計數(shù)
HBPT5218	0.1%蛋白胨水管(9ml)0.1% Peptone Broth	9ml*20支	用于樣品的稀釋
HB9252	pH7.0磷酸鹽緩沖液pH7.0 Phosphate Buffer	250g	用于制備藥品樣品的稀釋液或沖洗液
HB9253	pH7.8磷酸鹽緩沖液PH7.8 Phosphate Buffer	250g	用于制備藥品樣品的稀釋液或沖洗液
HB9254	pH8.0磷酸鹽緩沖液pH8.0 Phosphate Buffer	250g	用于制備藥品樣品的稀釋液或沖洗液
HB5218-1	0.1%蛋白胨水0.1% Peptone Broth	250g	用于樣品的稀釋
HB8454-2	PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液（中國藥典）Buffered Sodium Chloride – Peptone Solution	250g	用于樣品制備的營養(yǎng)液
HB0109-7	營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（中國藥典）Nutrient Agar Medium	250g	用于藥品中細菌總數(shù)計數(shù)
HB0108-4	營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（中國藥典）	250g	用于藥品中一般細菌的增菌培養(yǎng)
HBKP5200	玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（顆粒）Rose Bengal Agar Medium	250g	用于霉菌和酵母菌計數(shù)
HB0177-1	胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）（中國藥典）Tryptose Soya Agar	250g	一種通用培養(yǎng)基，用于各種微生物的培養(yǎng)(中國藥典)
HB0253-71	沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基（中國藥典）Sabouraud Dextrose Broth	250g	用于霉菌和酵母菌的增菌培養(yǎng)
HB0253-81	沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA）（中國藥典）Sabouraud Dextrose Agar	250g	用于真菌檢測
HB8454-2	PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液（中國藥典）Buffered Sodium Chloride Peptone Solution	250g	用于樣品制備的營養(yǎng)液
HB8742	pH7.6磷酸鹽緩沖液PH7.6 Phosphate Buffer	250g	用于藥品檢測中樣品的稀釋液
HB8743	pH6.8磷酸鹽緩沖液PH6.8 Phosphate Buffer	250g	用于藥品檢測中樣品的稀釋液
HB4114-19	胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）（中國藥典）TSB	250g	一種通用的營養(yǎng)培養(yǎng)基,，用于各種微生物的培養(yǎng)
HBKP5190-5	硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(顆粒)Thiolglycollate Medium	250g	用于藥品,、生物制品無菌檢測,檢測好氧菌和厭氧菌
HBKP8454-2	PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液（中國藥典）(顆粒)Buffered Sodium Chloride – Peptone Solution	250g	用于樣品制備的營養(yǎng)液
HBPT8621-1	磷酸鹽緩沖液管（PBS pH7.2）（9ml）PBS broth	9ml*20支/盒	用于菌落總數(shù)，大腸菌群,，金葡菌,，大腸桿菌樣品制備
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HB5184-31	溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基（中國藥典）Cetrimide Agar Medium	250g	用于綠膿假單胞菌的分離培養(yǎng)（中國藥典）
HBPM034-4	含青霉素酶TSA平板（9cm）TSA surface contact dish	9cm*10個/包	用于環(huán)境器皿、設(shè)備和表面的無菌檢測
HBPM0167-1	R2A瓊脂平皿（7cm）R2A Agar Plate	7cm*10個/包	用于純化水中菌落總數(shù)的測定
HBPP4114-100	胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）瓶裝（100ml）Trypticase(Tryptic) Soy Broth	100ml*20瓶	一種通用的營養(yǎng)培養(yǎng)基,，用于各種微生物的培養(yǎng)(丁基膠塞口)
HBPP8454-100	PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液瓶裝（100ml）Buffered Sodium Chloride - Peptone Solution	100ml*20瓶	用于制備藥品樣品的稀釋液或沖洗液
HB5190	液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基Thiolglycollate Medium	250g	用于藥品,、生物制品無菌檢測，檢測好氧菌和厭氧菌（GB標準）
HB5190-9	需氧-厭氧菌瓊脂培養(yǎng)基Aerobic Anaerobic Agar medium	250g	用于藥品,、生物制品的無菌檢測,，檢測好氧菌和厭氧菌
HB0375	0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基（中國藥典）0.5% Glucose Brother Medium	250g	用于藥品中硫酸鏈霉素等抗生素的無菌檢查

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一,、中國藥典2015年版四部（通則1105）相關(guān)標準解讀

適用范圍
適用于純化水及制藥用水系統(tǒng)中微生物限度的測定，尤其針對受氯氣損傷的細菌復蘇及生長緩慢的耐氯菌檢測[5],。

核心檢測方法
采用薄膜過濾法,，取不少于1ml樣品過濾后，使用R2A瓊脂培養(yǎng)基在30℃條件下培養(yǎng)[5],。

檢出限與定量限
? 培養(yǎng)時間延長至5-7天可顯著提高檢出率
? 最低檢測限達1CFU/ml（需結(jié)合具體驗證數(shù)據(jù)）[5]

質(zhì)控樣品要求
需使用銅綠假單胞菌（CMCC 10104）和枯草芽孢桿菌（CMCC 63501）進行培養(yǎng)基適用性驗證,，回收率應≥70%[5]。

關(guān)鍵實驗步驟
1. 培養(yǎng)基配制：每升蒸餾水溶解15.2g干粉
2. 滅菌條件：121℃高壓滅菌15分鐘
3. pH控制：滅菌后pH需保持7.2±0.2[5]

特別說明
? 需在20-28℃環(huán)境培養(yǎng)5-7天
? 培養(yǎng)基滅菌后允許稍渾濁
? 不可使用結(jié)塊或污染培養(yǎng)基[5]

[5] R2A瓊脂培養(yǎng)基(2015藥典)

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