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瓊脂培養(yǎng)基N（溴化十六烷基三甲銨瓊脂）/用于綠膿假單胞菌的分離培養(yǎng)(EP標(biāo)準(zhǔn))

HB5184-1

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瓊脂培養(yǎng)基N（溴化十六烷基三甲銨瓊脂）介紹：

用途:用于綠膿假單胞菌的分離培養(yǎng),。

用法

Suspend ?45.3g/liter, ?add ? 10ml ?glycerol / liter, ?heat ?to ? boiling ?for ?1? min ?with ?shaking, ?autoclave ?( 15 ?min ?at ?121℃).Cool ? to ?50℃ and ?pour into Petri ? dishes.

稱(chēng)取本品45.3g,加熱溶解于1000ml純化水中, 加入甘油10ml,煮沸使混合均勻,分裝三角瓶 ,121℃高壓滅菌15分鐘冷至50℃時(shí),傾入無(wú)菌平皿備用,。

注：培養(yǎng)基中含少量氯化鎂,，滅菌后可能出現(xiàn)微量沉淀,。

原理：

1.營(yíng)養(yǎng)成分：銅綠假單胞菌分解蛋白質(zhì)能力較強(qiáng)，而發(fā)酵糖類(lèi)能力較低,，在培養(yǎng)基組分中明膠胰酶水解物和甘油為銅綠假單胞菌的生長(zhǎng)提供碳、氮源,、維生素和生長(zhǎng)因子,。

2.無(wú)機(jī)鹽：氯化鎂和硫酸鉀可以促進(jìn)綠膿菌素的產(chǎn)生，并維持滲透壓,。

3.選擇性培養(yǎng)的原理：溴化十六烷基三甲銨(cetrimide)作為一種季銨鹽陽(yáng)離子表面活性劑,，通過(guò)改變細(xì)菌細(xì)胞的通透性,，使細(xì)菌發(fā)生自溶或引起菌體蛋白質(zhì)變性沉淀，導(dǎo)致細(xì)菌死亡,，有較強(qiáng)的抑菌作用,。銅綠假單胞菌對(duì)溴化十六烷基三甲銨有一定的耐受性，因此,，被用于銅綠假單胞菌的選擇培養(yǎng),。

4.顏色：銅綠假單胞菌生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生兩種水溶性色素：黃色的熒光素和綠色的綠膿菌素，所以在溴化十六烷基三甲銨瓊脂平板上菌落呈黃綠色,。

銅綠假單胞菌在瓊脂培養(yǎng)基N（EP）上的生長(zhǎng)特征：

有綠色色素

瓊脂培養(yǎng)基N（溴化十六烷基三甲銨瓊脂）(EP)微生物靈敏度試驗(yàn):

按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,，接種以下質(zhì)控菌株，放置30-35℃需氧培養(yǎng)18-24小時(shí),。

注：回收率計(jì)算時(shí),，用TSA瓊脂做對(duì)照培養(yǎng)基。

十六烷三甲基溴化銨瓊脂的使用原理及方法：

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一,、適用范圍

用于藥品,、化妝品及天然礦泉水中銅綠假單胞菌的選擇性分離培養(yǎng)，通過(guò)溴化十六烷基三甲銨抑制非目標(biāo)菌生長(zhǎng)[1][5][6],。

二,、核心檢測(cè)方法

基于選擇性抑菌原理：溴化十六烷基三甲銨（CTAB）通過(guò)破壞非銅綠假單胞菌的細(xì)胞膜完整性實(shí)現(xiàn)選擇性分離，結(jié)合甘油,、硫酸鉀和氯化鎂促進(jìn)目標(biāo)菌色素表達(dá)[1][6][8],。

三、檢出限與定量限

培養(yǎng)基對(duì)銅綠假單胞菌的最低檢出限為1 CFU/g（或mL）,，定量限通過(guò)菌落計(jì)數(shù)法實(shí)現(xiàn),，要求目標(biāo)菌在平板上形成典型黃綠色菌落[1][6]。

四,、質(zhì)控樣品要求

質(zhì)控菌株包括銅綠假單胞菌（CMCC(B)10104或ATCC27853）及大腸埃希氏菌（CMCC(B)44102或ATCC25922）,，要求目標(biāo)菌生長(zhǎng)率（PR）達(dá)0.5-2，非目標(biāo)菌完全抑制[1][5][6],。

五,、關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)步驟

1. 稱(chēng)取45.3g干粉，加入1L蒸餾水及10mL甘油,，煮沸溶解后121℃滅菌15分鐘,；
2. 傾注平板前冷卻至50℃,，避免高溫破壞CTAB活性；
3. 樣品劃線接種后35-37℃培養(yǎng)24-48小時(shí),，觀察菌落形態(tài)及色素表達(dá)[1][5][6][8],。

六、特別說(shuō)明

1. 含CTAB成分需嚴(yán)格避光保存,，開(kāi)封后需密封防潮,；
2. 部分銅綠假單胞菌株可能不產(chǎn)色素，需結(jié)合氧化酶試驗(yàn)等補(bǔ)充鑒定,；
3. 培養(yǎng)基滅菌后需立即使用,，避免反復(fù)加熱導(dǎo)致選擇性下降[1][6][8]。

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