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肺炎克雷伯氏菌/研究、質量控制

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研究、質量控制

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一,、適用范圍

適用于食品、水樣,、臨床樣本（如痰液,、血液）及環(huán)境樣品中肺炎克雷伯氏菌的檢測，涵蓋致病性評估,、耐藥性分析及流行病學調查[1][8],。

二、核心檢測方法

1. PCR檢測：使用特異性引物擴增靶基因（如16S rRNA）,，檢測靈敏度高[1],。
2. 分離培養(yǎng)：采用麥康凱肌醇阿東醇羧芐青霉素培養(yǎng)基（MIAC）進行選擇性培養(yǎng)[6][8]。
3. 生化鑒定：通過革蘭染色,、VP試驗,、MR試驗等確定菌株特性[5][8]。
4. 藥敏試驗：通過紙片擴散法（K-B法）評估菌株耐藥性[9],。

三,、檢出限與定量限

- PCR法：檢出限為10³ CFU/mL，定量限為10⁴ CFU/mL[1],。
- 培養(yǎng)法：檢出限為1 CFU/g（樣本）,，需結合增菌步驟提高靈敏度[6][8]。

四,、質控樣品要求

- 陽性對照：采用標準菌株（如ATCC 700603）驗證檢測體系有效性[9],。
- 陰性對照：使用無菌生理鹽水或非目標菌株（如大腸埃希菌）排除交叉污染[1][8]。
- 重復測試：同一批次樣本需至少重復3次以確保結果穩(wěn)定性[6],。

五,、關鍵實驗步驟

1. 樣本前處理：臨床樣本需離心濃縮，環(huán)境樣本需過濾富集[1][6],。
2. DNA提取：使用酚-氯仿法或商業(yè)試劑盒提取細菌基因組DNA[1][8],。
3. PCR擴增：反應條件為95℃預變性5分鐘，隨后35循環(huán)（95℃ 30秒,，55℃ 30秒,，72℃ 1分鐘）[1]。
4. 結果判讀：凝膠電泳分析擴增產物,，出現(xiàn)特異性條帶即為陽性[1][6],。

六、特別說明

- 生物安全：實驗需在BSL-2實驗室進行,，避免氣溶膠污染[8][9],。
- 耐藥性報告：若檢測到產超廣譜β-內酰胺酶（ESBLs），需單獨標注并建議臨床調整用藥方案[9]。
- 結果解釋：PCR陽性僅提示靶基因存在,，需結合培養(yǎng)和表型鑒定確認活菌感染[1][6],。

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