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大腸埃希氏菌噬菌體Phi-X174定量標(biāo)準(zhǔn)樣品/YY/T 0689-2008《血液和體液防護(hù)裝備防護(hù)服材料抗血液傳播病原體穿透性能測(cè)試 Phi-X174噬菌體試驗(yàn)方法》；YY/T 1497-2016 醫(yī)用防護(hù)口罩材料病毒過濾效率評(píng)價(jià)測(cè)試方法Phi-X174菌體測(cè)試方法,；YY/T1777-2021男用避孕套合成材料避孕套技術(shù)要求與試驗(yàn)方法

A0250

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2支/盒

CICC

定量/10^10 PFU/支

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適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品及環(huán)境樣本中沙門氏菌,、志賀氏菌和致瀉大腸埃希氏菌的快速篩查與鑒定，通過噬菌體特異性裂解反應(yīng)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)菌的定性檢測(cè),。

核心檢測(cè)方法

采用雙層瓊脂平板法,，通過宿主菌與噬菌體的特異性反應(yīng)形成噬菌斑，結(jié)合菌株生化鑒定確認(rèn)目標(biāo)病原體,。

檢出限與定量限

檢測(cè)靈敏度為10²~10³ PFU/mL（噬菌斑形成單位/毫升）,，定量限需結(jié)合宿主菌濃度梯度實(shí)驗(yàn)確定。

質(zhì)控樣品要求

需同步使用標(biāo)準(zhǔn)菌株（如大腸埃希氏菌ATCC 25922）和陰性對(duì)照菌株,，確保噬菌體宿主特異性及檢測(cè)系統(tǒng)有效性,。

關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)步驟

1. 宿主菌預(yù)培養(yǎng)（37℃, 6h）；
2. 噬菌體與宿主菌混合孵育（雙層瓊脂法）,；
3. 噬菌斑計(jì)數(shù)與形態(tài)學(xué)確認(rèn),；
4. 陽(yáng)性菌株的生化驗(yàn)證。

特別說明

實(shí)驗(yàn)需在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）進(jìn)行,，噬菌體保存需避免反復(fù)凍融,，檢測(cè)結(jié)果需結(jié)合其他分子方法復(fù)核,。

適用范圍

適用于地表水,、地下水及廢水中大腸埃希氏菌的定量檢測(cè),，包括環(huán)境監(jiān)測(cè)和衛(wèi)生評(píng)價(jià)領(lǐng)域。

核心檢測(cè)方法

基于β-葡萄糖醛酸酶（GUS）底物反應(yīng),，通過比色法或熒光法測(cè)定大腸埃希氏菌濃度,。

檢出限與定量限

最低檢測(cè)濃度為1 MPN/100mL（最可能數(shù)法），定量線性范圍為10¹~10⁵ CFU/mL,。

質(zhì)控樣品要求

每批次需包含空白對(duì)照,、陽(yáng)性對(duì)照（大腸埃希氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株）及基質(zhì)加標(biāo)樣品，控制交叉污染風(fēng)險(xiǎn),。

關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)步驟

1. 樣品過濾與富集（44.5℃, 24h）,；
2. 酶底物反應(yīng)（37℃, 4h）；
3. 結(jié)果判讀（比色/熒光讀數(shù)）,。

特別說明

需注意非目標(biāo)菌（如產(chǎn)氣腸桿菌）可能產(chǎn)生的假陽(yáng)性,，建議結(jié)合選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行補(bǔ)充驗(yàn)證。

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