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PNPG試劑/用于克羅諾桿菌的快速鑒定

GB210

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2ml*10支

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PNPG試劑介紹：

中文名：4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷

英?文：4 Nitrophenyl(PNP)α-D-glucopyranoside??

用?途：用于克羅諾桿菌的快速鑒定

標準依據(jù)：ISO? 22964：2017 ?食品鏈微生物學-克羅諾桿菌屬基準檢驗方法

實驗方法及作用：

在純菌的懸液中加入4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷,，37℃水浴培養(yǎng)4h后，于405nm處測定吸光度,。有研究發(fā)現(xiàn),，大約8%的克羅諾桿菌不能在TSA上產(chǎn)黃色色素,。而且在TSA上培養(yǎng)需要48h是為了觀察黃色素的產(chǎn)生，作為目的菌判斷的補充實驗,，這在一定程度上可能存在漏檢的可能,，并降低了鑒定的工作效率。

實驗準備：

安瓿瓶：從包裝盒中取出安瓿瓶,，朝易折點（瓶頸上方藍點）反方向用力折開安瓿瓶：或用砂輪劃一圈安瓿瓶瓶頸,，然后用力折開安瓿瓶，插入安瓿瓶架中,，如果染菌或變色,，則不能使用，重新拿一支,。

試管：從包裝盒中取出試管,，插入試管架中，如果染菌或變色,，則不能使用,，重新拿一支。

注：折開安瓿瓶時最好包裹紗布,，以免劃傷手指,。

接種方法：用接種環(huán)挑取單個純化可以菌落至2ml無菌0.85%生理鹽水中，制成均一渾濁的菌懸液,，將2ml菌懸液加入至PNPG試劑中,，37℃水浴培養(yǎng)4h。培養(yǎng)結(jié)束后,，以加入2ml無菌生理鹽水的PNPG試劑管為空白對照,，在405nm波長處測OD值。

α-葡萄糖苷酶試驗在克羅諾桿菌鑒定中的應(yīng)用：

PNPG試劑相關(guān)產(chǎn)品：

產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品說明及用途
HB0177-8	胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）（參比培養(yǎng)基）TSA Agar	250g	一種通用的營養(yǎng)培養(yǎng)基,，用于各種微生物的培養(yǎng)
HBPM0177-8	胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）平板（9cm）（參比培養(yǎng)基）TSA Agar	9cm*10	一種通用的營養(yǎng)培養(yǎng)基,，用于各種微生物的培養(yǎng)
HB0177-25K	胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）（25kg）TSA Agar	25kg/桶	一種通用的營養(yǎng)培養(yǎng)基，用于各種微生物的培養(yǎng),，也可用于阪崎腸桿菌的純化培養(yǎng)和產(chǎn)黃色素試驗
HB7012-8	克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基Cronobacter Chromogenic Medium	1000ml	用于嬰兒配方奶粉和其他食品種克羅諾桿菌的快速檢測
HB4084	緩沖蛋白胨水（BPW）Buffered Peptone Water	250g	用于沙門氏菌前增菌培養(yǎng)，亦可用于李斯特氏菌前增菌培養(yǎng)（GB,、SN標準）
HB0177	胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）TSA Agar	250g	一種通用的營養(yǎng)培養(yǎng)基,，用于各種微生物的培養(yǎng)，也可用于阪崎腸桿菌的純化培養(yǎng)和產(chǎn)黃色素試驗
HB7012	克羅諾桿菌（阪崎腸桿菌）顯色培養(yǎng)基Cronobacter (Enterobacter Sakazakii) Chromogenic Medium	1000ml	用于阪崎桿菌的顯色培養(yǎng),，阪崎桿菌顯藍色,，其它腸桿菌顯無色
HB8297-1	腦心浸液肉湯(BHI) BHI Broth	250g	營養(yǎng)豐富，用于培養(yǎng)各種細菌（ISO標準）
HB0102-2	改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬古霉素（mLST-Vm）Modified Lauryl Sulfate Tryptose Broth-Vancomycin Medium	250g	用于奶粉中坂崎腸桿菌檢驗時增菌培養(yǎng)（GB標準）
HB0102-2a	萬古霉素溶液Vancomycin Solution	1mg*5支	每支添加于100mlmLST-VM中
HB7012	克羅諾桿菌（阪崎腸桿菌）顯色培養(yǎng)基Cronobacter (Enterobacter Sakazakii) Chromogenic Medium	1000ml	用于阪崎桿菌的顯色培養(yǎng),，阪崎桿菌顯藍色,，其它腸桿菌顯無色
HB0176	VRBG瓊脂VRBG Agar	250g	用于奶粉中阪崎桿菌的分離培養(yǎng)(FDA,、SN方法)
HB0115	西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂Simmons Citrate Medium	250g	用于腸道菌的檸檬酸鹽利用試驗(GB標準)
SHBG11	阪崎腸桿菌成套生化鑒定管biochemical identification of sets of tubes	11種2套/盒5盒	用于阪崎桿菌的生化試驗
HB2100	氧化酶試紙Oxidase Strips	10片	用于細菌的氧化酶試驗
HB7012-4	阪崎腸桿菌分離瓊脂（ESIATM）Enterobacter Sakazakii Isolation Agar	200g	用于阪崎腸桿菌分離培養(yǎng)
HB0177-5k	胰蛋白胨大豆瓊脂TSA Agar	5kg/袋	一種通用培養(yǎng)基，用于各種微生物的培養(yǎng)
HB8900	克洛諾菌篩選肉湯基礎(chǔ)（CSB增菌液）Cronobacter Screening Broth Base	250g	用于克洛諾菌的選擇性增菌培養(yǎng)
HBKP0177	胰蛋白胨大豆瓊脂（顆粒）TSA Agar Granule	250g	一種通用的營養(yǎng)培養(yǎng)基,，用于各種微生物的培養(yǎng),，也可用于阪崎腸桿菌的純化培養(yǎng)和產(chǎn)黃色素試驗

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以上信息僅供參考，請以實物批次為準,！

ISO 22964:2017 食品鏈微生物學-克羅諾桿菌屬基準檢驗方法

適用范圍

適用于食品及食品生產(chǎn)環(huán)境中克羅諾桿菌屬的定性檢測,，特別針對無法通過常規(guī)TSA培養(yǎng)基顯色鑒定的菌株[3]。

核心檢測方法

基于α-葡萄糖苷酶活性檢測：純菌懸液與PNPG試劑反應(yīng)后,，通過分光光度法測定405nm處吸光度變化,，判斷酶活性存在[3]。

檢出限與定量限

該方法為定性檢測,，未規(guī)定具體檢出限,。陽性判定依據(jù)為顯色反應(yīng)與空白對照的顯著吸光度差異[3]。

質(zhì)控樣品要求

需同步進行陽性對照（已知產(chǎn)α-葡萄糖苷酶菌株）和陰性對照（無菌生理鹽水）,，確保試劑有效性[3],。

關(guān)鍵實驗步驟

1. 菌懸液制備：挑取單菌落制成2ml無菌生理鹽水懸液
2. 反應(yīng)體系：菌懸液與PNPG試劑等體積混合
3. 培養(yǎng)條件：37℃水浴精確控制4小時
4. 檢測方法：使用空白管校準后測定405nm吸光度[3]

特別說明

1. 需注意約8%克羅諾桿菌在TSA培養(yǎng)基不產(chǎn)黃色素，需結(jié)合本方法補充鑒定
2. 安瓿瓶開封需防污染操作,，變色或染菌需廢棄
3. 水浴時間偏差超過±10分鐘需重新試驗[3]

以上信息僅供參考,，請以相應(yīng)標準的原文為準！