多粘菌素B用培養(yǎng)基/多粘菌素B效價(jià)測(cè)定
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用途:用于多粘菌素B效價(jià)測(cè)定。
成分(g/L)
用法
稱取本品 35.5g,加熱攪拌溶解于 1000ml 純化水中,115℃高壓滅菌 30分鐘,備用。
多粘菌素B用培養(yǎng)基微生物靈敏度試驗(yàn):
按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,接種以下質(zhì)控菌株,放置35-37℃需氧培養(yǎng)16-18小時(shí)。
注:回收率計(jì)算時(shí),用TSA瓊脂做對(duì)照培養(yǎng)基。?
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適用于食品中沙門氏菌的分離培養(yǎng),多粘菌素B用培養(yǎng)基在該標(biāo)準(zhǔn)中作為選擇性培養(yǎng)基使用,用于抑制雜菌并促進(jìn)目標(biāo)菌生長(zhǎng)[2]。
采用增菌培養(yǎng)→選擇性平板分離→生化鑒定流程,培養(yǎng)基需在36±1℃培養(yǎng)18-24小時(shí),觀察菌落形態(tài)和顯色反應(yīng)[2][7]。
檢出限為1 CFU/25g樣品;定量限依據(jù)樣品類型和稀釋倍數(shù)調(diào)整,通常采用十倍梯度稀釋法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)[2]。
每批次需同步進(jìn)行陰性質(zhì)控(無菌生理鹽水)和陽性質(zhì)控(標(biāo)準(zhǔn)沙門氏菌株ATCC 14028),回收率應(yīng)≥70%[2][7]。
① 培養(yǎng)基pH值需嚴(yán)格控制在6.5-6.7;② 高壓滅菌條件為121℃/15分鐘;③ 添加多粘菌素B時(shí)需冷卻至50℃以下以避免失活[2][7]。
培養(yǎng)基開封后需密封避光保存,使用前需進(jìn)行性能驗(yàn)證。含多粘菌素B的培養(yǎng)基需標(biāo)注有效期,過期后禁止使用[2][7]。
針對(duì)水產(chǎn)品中副溶血性弧菌的檢測(cè),規(guī)定多粘菌素B肉湯基礎(chǔ)(SCPB)作為選擇性增菌培養(yǎng)基[7]。
采用堿性蛋白胨水預(yù)增菌→SCPB選擇性增菌→TCBS平板分離的三步法,增菌時(shí)間8-18小時(shí)[7]。
最低檢出限為10 CFU/g,定量分析時(shí)需進(jìn)行MPN法計(jì)算,置信區(qū)間為95%[7]。
每批次需同時(shí)檢測(cè)陽性質(zhì)控株(ATCC 17802)和陰性質(zhì)控株(大腸桿菌ATCC 25922),生長(zhǎng)符合率應(yīng)≥90%[7]。
① 培養(yǎng)基配制需添加20g/L NaCl;② 多粘菌素B添加量為25000單位/100ml;③ 分裝體積誤差需≤2%[7]。
強(qiáng)調(diào)培養(yǎng)基中NaCl濃度對(duì)弧菌生長(zhǎng)的特異性影響,禁止使用含碘化物的食鹽配制溶液[7]。
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