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當(dāng)前位置： 首頁 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 菌種 培養(yǎng)基 DNA酶瓊脂/用于細(xì)菌DNA酶檢測（GB/T5750.12-2023）
DNA酶瓊脂/用于細(xì)菌DNA酶檢測（GB/T5750.12-2023）_
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DNA酶瓊脂/用于細(xì)菌DNA酶檢測（GB/T5750.12-2023）

HB4118 {{goodObj.price > 0 ? '￥' + goodObj.price : '咨詢'}} ￥{{goodObj.sell_price || 0}} 咨詢 100g {{inventory}} {{goodObj.date}} hopebio {{item.norm}} 見證書
  • DNA酶

    R017414-1g | ≥2,000 Kunitz units/mg(以蛋白計量)

  • DNA酶

    R017414-100mg | ≥2,000 Kunitz units/mg(以蛋白計量)

  • DNA酶

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  • DNA酶

    R096803-100mg | 300U/mg, from bovine pancreas

  • DNA酶

    R096803-500mg | 300U/mg, from bovine pancreas

  • DNA酶

    R096803-1g | 300U/mg, from bovine pancreas

DNA酶瓊脂介紹：

用途：用于細(xì)菌DNA酶檢測,。

成分(g/L)

胰蛋白胨15.0
大豆胨5.0
氯化鈣0.02
氯化鈉5.0
DNA2.0
瓊脂15.0
pH值7.3±0.225℃

檢驗原理：

胰蛋白胨和大豆胨提供碳源和氮源,；有脫氧核糖核酸酶的細(xì)菌分解培養(yǎng)基中的脫氧核糖核酸(DNA),，使DNA長鏈水解成數(shù)個單核苷酸的寡核苷酸短鏈,；氯化鈣提供陽離子作為激活劑,；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑,。將鹽酸滴在培養(yǎng)基表面,，如DNA酶陽性，其菌落周圍可以產(chǎn)生明顯透明環(huán),，如DNA酶陰性,，鹽酸與完整的脫氧核糖核酸反應(yīng)，可形成渾濁的沉淀,；如果加入0.1%甲苯胺藍(lán)溶液,，甲苯胺藍(lán)為指示劑,，DNA酶陽性時，水解DNA部分為薔薇色,；DNA酶陰性時,，甲苯胺藍(lán)顯藍(lán)色。

用法：

稱取本品42.0g,，緩緩加熱溶解于1000ml蒸餾水中（避免形成不溶性絲狀物）,，116℃高壓滅菌15分鐘，冷至50℃左右時,，傾入無菌平皿,。將平板培養(yǎng)基分成4-8區(qū)，每區(qū)用接種環(huán)劃線肉湯培養(yǎng)物,，37℃培養(yǎng)18-24小時,，在培養(yǎng)基表面滴加 1mol/L鹽酸，若為DNA酶陽性,，在生長菌落周圍產(chǎn)生明顯透明環(huán),。如果加入0.1%甲苯胺藍(lán)溶液，殘留DNA部分變藍(lán),，其水解部分變?yōu)樗N薇色,。

注：培養(yǎng)基含少量氯化鈣，滅菌后可能出現(xiàn)微量沉淀,。

DNA酶瓊脂上細(xì)菌菌落特征：

DNA酶瓊脂

金黃色葡萄球菌ATCC25923

DNA酶瓊脂

金黃色葡萄球菌ATCC6538

DNA酶瓊脂微生物靈敏度試驗：

按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,，接種以下質(zhì)控菌株，放置37±1℃需氧培養(yǎng)18-24小時,。

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    一,、適用范圍

    本標(biāo)準(zhǔn)適用于細(xì)菌DNA酶活性的檢測,，特別是用于金黃色葡萄球菌,、假單胞菌屬等微生物的鑒別試驗。檢測基于DNA酶對脫氧核糖核酸的水解能力,，通過培養(yǎng)基顏色變化或透明環(huán)形成進(jìn)行判定[9],。

    二、核心檢測方法

    采用DNA酶甲基綠瓊脂（DTA）培養(yǎng)基法：
    1. 配制含0.005%甲基綠的DNA瓊脂培養(yǎng)基,，pH 7.3±0.2
    2. 待測菌株劃線接種于平板上,，37℃培養(yǎng)18-24小時
    3. 直接觀察菌落周圍是否出現(xiàn)透明環(huán)或培養(yǎng)基褪色區(qū)[7][9]

    三、檢出限與定量限

    1. 檢出限：DNA酶活性陽性菌株在培養(yǎng)后應(yīng)形成≥2mm的清晰透明環(huán)
    2. 半定量判定：透明環(huán)直徑與菌落直徑比值≥1.5為強陽性反應(yīng)

    四,、質(zhì)控樣品要求

    1. 陽性對照：金黃色葡萄球菌ATCC 25923（應(yīng)形成明顯透明環(huán)）
    2. 陰性對照：表皮葡萄球菌ATCC 14990（無透明環(huán)）
    3. 培養(yǎng)基質(zhì)控：未接種平板應(yīng)保持均勻藍(lán)綠色,，無自發(fā)褪色

    五、關(guān)鍵實驗步驟

    1. 甲基綠純化：0.5%水溶液用氯仿抽提5-7次至無色
    2. 培養(yǎng)基滅菌：121℃高壓15分鐘,，冷卻至50℃加入染料
    3. 接種要求：單個菌落劃線,，避免過度生長影響觀察
    4. 結(jié)果判讀：培養(yǎng)后無需酸處理，直接肉眼觀察[7][9]

    六,、特別說明

    1. 甲基綠需新鮮配制,，避光保存不超過2周
    2. 培養(yǎng)基中DNA含量需嚴(yán)格控制在2.0g/L±0.2g/L
    3. 變形桿菌屬可能出現(xiàn)假陽性，需結(jié)合其他生化試驗
    4. 培養(yǎng)時間超過24小時可能導(dǎo)致褪色擴散干擾判定

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