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TMP瓊脂培養(yǎng)基/用于金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng)（GB/T5750.12-2023）

HB4152

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250g

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TMP瓊脂培養(yǎng)基介紹：

用途：用于金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng),。

添加劑：每瓶需配套添加1盒HB0123 1%亞碲酸鉀溶液使用。

成分（g/L）

蛋白胨	20.0
酵母浸粉	5.0
氯化鈉	40.0
磷酸氫二鉀	5.0
甘露醇	5.0
苯酚紅	0.025
瓊脂	15.0
pH值7.5±0.1	25℃

檢驗原理：

蛋白胨,、酵母浸粉提供基本的營養(yǎng),；高濃度的氯化鈉具有選擇性，可抑制部分不耐鹽細(xì)菌的生長,；甘露醇為可發(fā)酵糖類,；磷酸氫二鉀為pH緩沖劑；苯酚紅為酸堿指示劑,；瓊脂為凝固劑,；較高濃度的亞碲酸鉀可抑制多數(shù)雜菌的生長,，并可被金黃色葡萄球菌還原，菌落呈黑色,。金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的耐鹽性,，可在此培養(yǎng)基中生長，并還原亞碲酸鉀,，菌落顯黑色,，同時可分解培養(yǎng)基中的甘露醇產(chǎn)酸，使培養(yǎng)基變黃,。

用法：

稱取本品90.0g,，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，121℃高壓滅菌15分鐘,，冷至50℃左右時,，加入無菌1%亞碲酸鉀溶液15ml，混勻,，傾入無菌平皿,，備用。

金黃色葡萄球菌在TMP瓊脂培養(yǎng)基上的生長特征：

黑色圓形凸起菌落,，菌落周圍變黃

TMP瓊脂培養(yǎng)基微生物靈敏度試驗：

按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,，接種以下質(zhì)控菌株，放置36±1℃需氧培養(yǎng)24-48小時,。注：回收率計算時,，用TSA瓊脂做對照培養(yǎng)基。

TMP瓊脂培養(yǎng)基相關(guān)產(chǎn)品：

產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品說明及用途
HB4114-6	10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯10% NaCl Soybean-Casein Digest Broth	250g	用于金黃色葡萄球菌增菌培養(yǎng)
HB4114	胰蛋白胨大豆肉湯（TSB）Trypticase (Tryptic) Soy Broth	250g	一種通用的微生物營養(yǎng)增菌肉湯,，也可用于金黃色葡萄球菌的MPN測定和藥品生產(chǎn)線無菌灌裝試驗（SN,、USP、EP標(biāo)準(zhǔn)）
HB4115	Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)Baird-Parker Agar Base	250g	用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)（GB,、FDA,、ISO、SN標(biāo)準(zhǔn)）
HB4116-1	亞碲酸鉀卵黃增菌液	5ml*10	每支添加于95mlBaird-Parker瓊脂基礎(chǔ)或瓊脂培養(yǎng)基O中
HB4118	DNA酶瓊脂DNase Agar	100g	用于細(xì)菌DNA酶檢測
HB4119	7.5%氯化鈉肉湯7.5% Sodium Chloride Broth	250g	用于金黃色葡萄球菌的選擇性增菌培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)）
HB4120	腸毒素產(chǎn)毒培養(yǎng)基Enterotoxin-producing medium	250g	用于金黃色葡萄球菌腸毒素產(chǎn)毒試驗
HB4121	亞碲酸鹽肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ)Sodium Tellurite Broth Base	250g	用于金黃色葡萄球菌的增菌培養(yǎng)（中國藥典）
HB4122	葡萄球菌增菌肉湯Staphylococcus Enrichment Broth	250g	用于凝固酶陽性葡萄球菌的選擇性增菌培養(yǎng)
HB8299	甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂Toluidine Blue DNA Agar	100g	用于DNA酶試驗
HBPT0109-4	普通瓊脂培養(yǎng)基管（長斜面）20支Nutrient Agar Slant Tube	20支/盒	用于細(xì)菌的純化培養(yǎng)
HB0153	哥倫比亞CNA瓊脂基礎(chǔ)Columbia CNA Agar Base	250g	用于革蘭氏陽性球菌的分離培養(yǎng)
HB4123-1	葡萄球菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基110號Staphylococcus Selective Agar NO.110	250g	用于金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng)
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HB4125	甘露醇卵黃培養(yǎng)基基礎(chǔ)Egg-Yolk Mannitol Salt Agar Base	250g	用于分離培養(yǎng)病原性金黃色葡萄球菌（日本標(biāo)準(zhǔn)）
HB4127	改良Giolitti and Cantoni肉湯Modified Giolitti and Cantoni Broth	250g	用于金黃色葡萄球菌的增菌培養(yǎng)
HB8478	腦心浸液瓊脂Brain Heart Infusion Agar	250g	營養(yǎng)豐富,，用于培養(yǎng)各種細(xì)菌
HB0374	普通肉湯培養(yǎng)基Broth Medium	250g	用于金黃色葡萄球菌和其它細(xì)菌的增菌培養(yǎng)
HB4123	葡萄球菌選擇性瓊脂Staphylococcus Selective Agar	250g	用于凝固酶陽性葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)
HBPT4114	TSB肉湯管（9ml）Trypticase(Tryptic) Soy Broth	9ml*20支	一種通用的微生物營養(yǎng)增菌肉湯,也可用于金黃色葡萄球菌的MPN測定和藥品生產(chǎn)線無菌灌裝試驗
HB0109-1	營養(yǎng)瓊脂斜面Nutrient agar slant	250g	用于細(xì)菌的純化培養(yǎng)
HB8297-8	腦心浸液肉湯(BHIB)培養(yǎng)基BHI Broth	250g	營養(yǎng)豐富,用于培養(yǎng)各種細(xì)菌(GB/T5750.12-2023 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn))
HB8478-12	腦心浸萃瓊脂(BHIA)培養(yǎng)基Brain Heart Infusion Agar	250g	營養(yǎng)豐富,用于培養(yǎng)各種細(xì)菌(GB/T5750.12-2023 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn))
HBPM8478-12	腦心浸萃瓊脂（BHIA）培養(yǎng)基平板(9CM）Brain Heart Infusion Agar	9cm*10/包	營養(yǎng)豐富,用于培養(yǎng)各種細(xì)菌(GB/T5750.12-2023 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn))
HB6242	豆粉瓊脂	250g	用于分離營養(yǎng)要求較高的致病菌
HB8621-1	磷酸鹽緩沖液（pH7.2）PBS broth	250g	用于樣品的稀釋
HBJ008	含225ml7.5%氯化鈉肉湯均質(zhì)袋	10個/盒	用于金黃色葡萄球菌的選擇性增菌培養(yǎng)
HB8278	革蘭氏染色液試劑盒Gram Stain Kit	5ml*8	用于細(xì)菌的革蘭氏染色試驗
HB8297-1	腦心浸液肉湯(BHI)Brain Heart Infusion Broth	250g	營養(yǎng)豐富,用于培養(yǎng)各種細(xì)菌
HBPM8299	甲苯胺藍(lán)-DNA酶平板（9cm）	9cm*10/包	用于金黃色葡萄球菌核糖酸酶檢測
HB8297-5	腦心浸出液肉湯（BHI）GB標(biāo)準(zhǔn)Brain Heart Infusion Broth	250g	營養(yǎng)豐富,用于培養(yǎng)各種細(xì)菌
HB4120-1	腸毒素產(chǎn)毒培養(yǎng)基(不含瓊脂)Enterotoxin Toxigenic Medium	250g	用于金黃色葡萄球菌腸毒素產(chǎn)毒試驗
HB4128	甘露醇高鹽瓊脂Mannitol Salt Agar	250g	用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)
HB8644	卻普曼瓊脂Chapman Agar	250g	用于檢測金黃色葡萄球菌
HB4117-4	凍干兔血漿Freeze	0.5ml*10	用于金黃色葡萄球菌的血漿凝固酶試驗（GB,、SN標(biāo)準(zhǔn)）
HBKP4125	甘露醇卵黃培養(yǎng)基（顆粒）Egg-Yolk Mannitol Salt agar Base	250g	用于金葡菌的分離培養(yǎng)
HBKP4128-22	甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基（顆粒）Mannitol Salt Agar	250g	用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)
HBPM5024	甘露醇氯化鈉瓊脂平板（9cm）Mannitol Salt Agar Plate	10個/包	用于金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng)
HB4114-4	胰酪胨大豆肉湯（TSB）Soybean-Casein Digest Broth	250g	用于金黃色葡萄球菌的選擇性增菌培養(yǎng)（公共衛(wèi)生場所檢驗）
HBKP8478	腦心浸液瓊脂（顆粒）Brain Heart Infusion Agar	250g	營養(yǎng)豐富，用于培養(yǎng)各種細(xì)菌
HB4128-22	甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基(中國藥典)Mannitol Salt Agar	250g	用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)
HBPT0109-1	營養(yǎng)瓊脂斜面管（20支）Nutrient Agar Slant Tube	20支	用于細(xì)菌的純化培養(yǎng)
HBBD0109-200	營養(yǎng)瓊脂(NA) 袋裝即用型(200ml)Nutrient Agar	200ml/袋*10	細(xì)菌計數(shù),、不含糖,，可作血瓊脂基礎(chǔ)和傳代用（GB標(biāo)準(zhǔn)）

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一,、適用范圍

TMP瓊脂培養(yǎng)基主要用于食品、藥品及環(huán)境樣品中金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng),，符合GB 4789.10-2016《食品微生物學(xué)檢驗金黃色葡萄球菌檢驗》及SN/T 0172-2010《出口食品中金黃色葡萄球菌檢驗方法》的適用范圍要求[1][7],。該培養(yǎng)基通過顯色反應(yīng)區(qū)分目標(biāo)菌與非目標(biāo)菌，適用于定量和定性檢測,。

二,、核心檢測方法

依據(jù)GB 4789.10-2016，TMP瓊脂采用傾注法或涂布法接種樣品液,，36℃培養(yǎng)18-24小時后,，通過菌落形態(tài)和顯色特征（如目標(biāo)菌呈藍(lán)色至紫色）進(jìn)行初步鑒定，并通過配套生化試驗確認(rèn)[1][7],。SN/T 0172-2010要求對可疑菌落進(jìn)行血漿凝固酶試驗或核酸鑒定,。

三、檢出限與定量限

GB 4789.10-2016規(guī)定定量檢測的檢出限為1 CFU/g（mL）,，定量范圍為30-200 CFU/平板,；定性檢測要求樣品液中至少含1個目標(biāo)菌[7]。SN/T 0172-2010要求定量限與GB標(biāo)準(zhǔn)一致,，同時強(qiáng)調(diào)樣品預(yù)處理需避免干擾物質(zhì)影響檢出率,。

四、質(zhì)控樣品要求

實(shí)驗需同步進(jìn)行陽性對照（如ATCC 25923金黃色葡萄球菌）和陰性對照（如大腸埃希氏菌ATCC 25922）,，確保培養(yǎng)基選擇性和顯色特性符合GB 4789.10-2016要求[7],。每批次培養(yǎng)基需驗證生長率（≥70%）和抑制率（非目標(biāo)菌抑制≥80%）。

五,、關(guān)鍵實(shí)驗步驟

1. 樣品制備：按標(biāo)準(zhǔn)方法制備1:10樣品勻液,；
2. 接種：取1mL樣品液與45-50℃熔化的TMP瓊脂混勻傾注平板，或直接涂布,；
3. 培養(yǎng)：36℃±1℃倒置培養(yǎng)18-24小時,；
4. 計數(shù)：選擇含30-200個菌落的平板，按顯色特征分類計數(shù),；
5. 確證：挑取典型菌落進(jìn)行革蘭氏染色,、血漿凝固酶試驗或分子生物學(xué)鑒定[1][7]。

六,、特別說明

1. 培養(yǎng)基需避光保存于2-8℃,，開封后需密封防潮；
2. 自制平板厚度需≥2mm（對應(yīng)Φ90mm平板裝量15-20mL）,；
3. 顯色結(jié)果需在24小時內(nèi)判讀,，避免色素擴(kuò)散；
4. 實(shí)驗人員需佩戴口罩操作,，防止吸入培養(yǎng)基粉塵[1][7],。

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