致瀉大腸埃希氏菌生化套裝/用于致瀉大腸埃希氏菌生化鑒定(GB/T4789/GB/T4789.30/SN/T0173-2010/SN/T0184.1)
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MH瓊脂即用型平板
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蛋白瘤胃球菌培養(yǎng)基基礎(chǔ)(含纖維二糖)
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CASO瓊脂
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HL-1細胞專用培養(yǎng)基
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改良MRS瓊脂即用型平板
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用于致瀉大腸埃希氏菌生化鑒定,。
添加劑:
需配套添加 1盒 HB8279 Kovacs 氏靛基質(zhì)試劑盒
需滴加試劑明細表?
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致瀉大腸埃希氏菌生化套裝質(zhì)量控制:按使用說明進行操作,,接種后置36±1℃培養(yǎng)。
以上信息僅供參考,,請以實物批次為準,!
GB 4789.6-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 致瀉大腸埃希氏菌檢驗
本標準適用于食品中致瀉大腸埃希氏菌的定性檢驗,包括預(yù)增菌,、選擇性增菌,、分離培養(yǎng)及生化鑒定等步驟。涵蓋肉制品,、乳制品,、蛋制品、蔬菜水果等各類食品基質(zhì)[6][8],。
采用三重檢測體系:
1. 初篩試驗:EC肉湯預(yù)增菌(36℃±1℃,18-24h)
2. 選擇性增菌:MAC/CT-SMAC平板分離
3. 確認試驗:生化反應(yīng)(三糖鐵瓊脂,、賴氨酸脫羧酶等)結(jié)合PCR毒力基因檢測[6][8]
最低檢出限為1CFU/25g(mL),定量檢測需結(jié)合MPN計數(shù)法,。樣品稀釋梯度建議設(shè)置3個連續(xù)十倍梯度,,每個梯度接種3管EC肉湯[6][8]。
每批次實驗需包含陽性對照(ATCC 25922)和陰性對照(無菌生理鹽水),。冷凍樣品解凍需在45℃以下水浴15min,,干燥樣品需無菌稱取后加入緩沖蛋白胨水活化[6][8]。
1. 樣品處理:25g樣品+225mL緩沖蛋白胨水均質(zhì)
2. 選擇性增菌:轉(zhuǎn)種EC肉湯44.5℃±0.2℃培養(yǎng)20h
3. 平板分離:MAC瓊脂劃線培養(yǎng)18-24h
4. 生化確認:三糖鐵瓊脂反應(yīng)觀察(斜面紅/底層黃)[6][8]
需區(qū)分致瀉型與非致瀉型大腸埃希氏菌,,重點關(guān)注eae,、stx1/2等毒力基因。冷凍樣品需避免反復(fù)凍融,,含防腐劑樣品需適當中和處理,。實驗環(huán)境應(yīng)滿足生物安全二級要求[6][8],。
SN/T 2797-2011 食品中致瀉大腸埃希氏菌檢測 MPCR-DHPLC法
適用于進出口食品中五種致瀉大腸埃希氏菌(ETEC、EPEC,、EHEC,、EIEC、EAEC)的快速篩查,,特別適用于通關(guān)時效要求高的口岸檢測[2],。
采用多重PCR結(jié)合變性高效液相色譜(DHPLC)技術(shù),同時檢測lt/st,、eae,、stx1/2、ipaH,、aggR等特征基因,。PCR擴增與DHPLC分析需在獨立分區(qū)完成[2]。
方法靈敏度達102 CFU/mL,,定量檢測需配套實時熒光定量PCR儀,。標準曲線需用已知濃度的DNA梯度制作[2]。
每批檢測應(yīng)包含陽性對照(含所有靶標基因的混合DNA)和陰性對照(無菌水),。DNA提取需使用經(jīng)驗證的試劑盒,,OD260/280比值需在1.8-2.0之間[2]。
1. 核酸提?。褐蠓蟹ɑ蛑椒ㄌ崛〖毦鶧NA
2. 多重PCR:94℃預(yù)變性5min,,35循環(huán)擴增
3. DHPLC分析:50℃洗脫溫度,0.9mL/min流速
4. 峰型判定:與標準菌株色譜峰保留時間比對[2]
需注意引物二聚體干擾,,建議每次運行前進行柱效驗證,。DHPLC設(shè)備需每周用75%乙腈沖洗維護,防止色譜柱污染,。陽性結(jié)果需經(jīng)傳統(tǒng)培養(yǎng)法確證[2],。
以上信息僅供參考,請以相應(yīng)標準的原文為準,!