GB 5009.298-2023食品中三氯蔗糖的測(cè)定應(yīng)用

來源與性質(zhì)：三氯蔗糖，俗稱蔗糖素，是一種高倍甜味劑，分子式為C12H19Cl3O8。穩(wěn)定性高，對(duì)光、熱、pH均很穩(wěn)定。極易溶于水、甲醇和乙醇，微溶于乙醚。在1976年由英國泰萊公司與倫敦大學(xué)共同研制并申請(qǐng)專利的一種新型甜味劑，并于1988年投入市場(chǎng)，是唯一以蔗糖為原料的功能性的甜味劑，可達(dá)到蔗糖的甜度約600倍（400~800倍）。三氯蔗糖特點(diǎn)具有無能量，高甜度，純正甜味，安全度高等，也是最理想的甜味劑之一。

應(yīng)用領(lǐng)域：三氯蔗糖穩(wěn)定性較高，在食品加工中要結(jié)合工廠實(shí)際需求在任何一道工序中集中添加，不僅使用較為便捷，且整體效果較好。在食品加工中應(yīng)用三氯蔗糖順應(yīng)市場(chǎng)需求趨勢(shì)，需要產(chǎn)品監(jiān)控人員對(duì)用量給予高度關(guān)注。廣泛應(yīng)用于飲料，烘焙食品，蜜餞類食品。

法規(guī)與標(biāo)準(zhǔn)：三氯蔗糖已列入《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》(GB2760)，并允許用于糖果、焙烤食品、醬及醬制品等食品類別。同時(shí)，其質(zhì)量規(guī)格執(zhí)行《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑三氯蔗糖》(GB25531)。關(guān)于三氯蔗糖的每日允許攝入量，根據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織/世界衛(wèi)生組織食品添加劑聯(lián)合專家委員會(huì)的評(píng)估結(jié)果，該物質(zhì)的每日允許攝入量為每千克體重0~15毫克。另外，需要注意的是，雖然三氯蔗糖在一段時(shí)間內(nèi)被批準(zhǔn)用于某些食品類別，但在2021年和2022年的信息公布中，有關(guān)三氯蔗糖擴(kuò)大使用范圍的申請(qǐng)被下達(dá)了“不予行政許可決定”。因此三氯蔗糖作為食品添加劑時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守相關(guān)規(guī)定，并確保其在允許的使用范圍內(nèi)。同時(shí)，也應(yīng)關(guān)注最新的食品安全法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)，以確保食品安全和消費(fèi)者的健康。

《GB 5009.298-2023食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的測(cè)定》于2023年9月6日發(fā)布，2024年3月6日實(shí)施，試樣中的三氯蔗糖用甲醇水提取，除去蛋白、脂肪，經(jīng)固相萃取柱凈化 、蒸干復(fù)溶富集后，用高效液相色譜儀，反相C18色譜柱分離，采用示差檢測(cè)器或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

曼哈格參考《GB 5009.298-2023食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的測(cè)定》，重現(xiàn)了國標(biāo)食品中三氯蔗糖的檢測(cè)方法，采用飲料中三氯蔗糖質(zhì)控樣品（BQC1060125621），BePure-25621T2Z-10ml(20000ug/mlin Acetonitrile/water)標(biāo)準(zhǔn)溶液，BESEP SPE COLUMN P-HLB 固相萃取柱凈化樣品，C18色譜柱分離，高效液相色譜儀蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。

一、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

單標(biāo)：乙腈:水=1:9中三氯蔗糖，20000 μg/mL

貨號(hào)：BePure-25621T2Z-10ml

二、前處理

萃取柱:N- 乙烯基吡咯烷酮和二乙烯基苯親水親脂平衡型填料，BESEP SPE COLUMN P-HLB 60um 200mg/6ml 30PK。

貨號(hào)：77033

質(zhì)控樣品：飲料中三氯蔗糖

貨號(hào)：BQC1060125621

1標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（1.00mg/mL）：移取 5.00 mLBePure-25621T2Z-10ml于100mL容量瓶中，用水定容至刻度,混勻。置于4℃冰箱中保存，保存期為 3個(gè)月。

三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：移取適量三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（1.00mg/mL）用水稀釋配制成質(zhì)量濃度分別為0.0200 mg/mL、0.0500 mg/mL、0.100 mg/mL、0.200 mg/mL、0.400 mg/mL、0.800mg/mL和 1.00mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。臨用現(xiàn)配。

2 提取

稱取混勻后試樣（飲料中三氯蔗糖BQC1060125621）2g（精確至 0. 001g）于50mL離心管，加入5mL水，渦旋混合器上振蕩3min后，加入15mL甲醇，0. 50mL乙酸鋅溶液和0.50mL亞鐵氧化鉀溶液，繼續(xù)振蕩30s，超聲波提取20min，以3000r/min 離心10min，將上清液移入50mL離心管中。沉淀物加入5.0mL甲醇水溶液（75十25），玻璃棒攪拌均勻后，渦旋混合器上振蕩 30s，以3000r/min離心10min，重復(fù)提取 2次，合并上清液。

將全部上清液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入30mL正己烷，振搖2min，靜置分層20min后，下層水相移至蒸發(fā)皿，于沸水浴上蒸發(fā)，當(dāng)蒸發(fā)皿中液體在1mL左右時(shí)用9mL水分3次沖洗蒸發(fā)皿，沖洗液合并移至15mL離心管中，超聲波處理 5min，以3000r/min離心10min待凈化。

3凈化

萃取柱：BESEPSPE COLUMN P-HLB（77033）

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器凈化方法

固相萃取柱使用前依次用4m甲醇、4m水活化，保持柱體濕潤(rùn) 。

將全部試樣提取上清液移入已活化的固相萃取柱，控制液體流速不超過 1滴/s，柱上液面為2mm 左右時(shí)加入1mL水，繼續(xù)保持液體流速為1滴/s，到柱中液體完全排出后，用3mL甲醇洗脫，收集全部洗脫液，于沸水浴上蒸干，殘?jiān)?1.00mL水- 乙睛溶液（89十11）溶解（如溶液有渾濁現(xiàn)象可將其移入離心管，10000r/min離心 5min），經(jīng)0. 45μm疏水微孔濾膜過濾，濾液為制備的試液，待測(cè)。

三、儀器檢測(cè)方法

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器

色譜柱：C18（250 mmX4.6 mm，5 μm）或性能相當(dāng)者

流動(dòng)相：A為水，B為乙睛，水十乙睛 =89十11。

流速：1.0 mL/min

柱溫：35 ℃

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器條件：氣流速：3L/min 蒸發(fā)溫度 110℃

進(jìn)樣量：20μL

四、檢測(cè)結(jié)果

五、譜圖

0.4mg/mL三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)曲線點(diǎn)液相色譜圖

0.8mg/mL三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)曲線點(diǎn)液相色譜圖

添加水平為0.2g/kg的飲料中三氯蔗糖的液相色譜圖

飲料中三氯蔗糖液相色譜圖

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

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