牛津瓊脂(OXA)基礎(chǔ)/用于李斯特氏菌的分離培養(yǎng)(ISO、SN標(biāo)準(zhǔn))
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用途:用于李斯特氏菌的分離培養(yǎng)(ISO、SN標(biāo)準(zhǔn))。
添加劑:每瓶需配套添加9盒 HB4171-1 OXA添加劑使用,每支添加于100ml牛津瓊脂(OXA)基礎(chǔ)中。
成分(g/L)
檢驗(yàn)原理:特殊蛋白胨和可溶性淀粉提供碳氮源、維生素和生長(zhǎng)因子;氯化鈉維持均衡的滲透壓;李斯特氏菌水解七葉苷與鐵離子反應(yīng)形成黑色6,7-二羥基香豆素;氯化鋰和其它的抗生素能抑制革蘭氏陰性菌和大多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
用法:
稱取本品5.85g,加熱溶解于100ml蒸餾水中,121℃高壓滅菌15分鐘,冷至50℃時(shí),加入1支牛津瓊脂抑菌劑【多粘菌素E(2mg)、放線菌酮(40mg)、吖啶黃素(0.5mg)、頭孢雙硫唑甲氧(0.2mg)、磷霉素(1mg)】,混勻,傾入無(wú)菌平皿,備用。
注:培養(yǎng)基中含少量淀粉、檸檬酸鐵銨,滅菌后可能出現(xiàn)微量沉淀。
單增李斯特氏菌在牛津瓊脂(OXA)基礎(chǔ)上的生長(zhǎng)特征:
黑色菌落,有黑色環(huán)
牛津瓊脂(OXA)基礎(chǔ)微生物靈敏度試驗(yàn):
按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,接種以下質(zhì)控菌株,放置35±1℃需氧培養(yǎng)24-48小時(shí)。 注:回收率計(jì)算時(shí),用TSA瓊脂做對(duì)照培養(yǎng)基。
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適用于食品、水質(zhì)及環(huán)境樣本中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的選擇性分離檢測(cè),特別針對(duì)復(fù)雜基質(zhì)樣本中目標(biāo)菌的富集培養(yǎng)[1][6]。
基于選擇性抑制原理:
? 氯化鋰抑制革蘭氏陰性菌
? 多粘菌素E、放線菌酮等抗生素抑制非目標(biāo)革蘭氏陽(yáng)性菌
? 七葉苷水解反應(yīng)作為特異性生化指示(黑色菌落)[2][6]
? 最低檢出限:10 CFU/g(食品基質(zhì))
? 定量檢測(cè)范圍:102-10? CFU/mL(需配套增菌步驟)[6]
? 陽(yáng)性對(duì)照:?jiǎn)魏思?xì)胞增生李斯特氏菌ATCC 19115
? 陰性對(duì)照:金黃色葡萄球菌ATCC 25923
? 回收率要求:≥70%(與TSA對(duì)照培養(yǎng)基比較)[6]
① 基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備:56.5g/L蒸餾水溶解,121℃滅菌15分鐘[2]
② 添加劑添加:冷卻至50℃時(shí)加入多粘菌素E(2mg/L)、放線菌酮(40mg/L)、吖啶黃素(0.5mg/L)[6]
③ 傾注平皿:厚度≥3mm,凝固后4℃保存≤7天[1]
? 培養(yǎng)基pH嚴(yán)格控制在7.0±0.2(25℃)
? 避免過(guò)度加熱導(dǎo)致的淀粉糊化(溶解溫度≤80℃)
? 含亞抑制劑量的頭孢雙硫唑甲氧(0.2mg/L)增強(qiáng)選擇性[6]
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