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【注意事項(xiàng)】:加熱過(guò)程不能使之沸騰,并且不能蒸干,。
芽孢染色鏡檢圖:
芽孢染色實(shí)驗(yàn)操作視頻:
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GB/T 41727-2022《農(nóng)用微生物菌劑功能評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)程》解讀
本標(biāo)準(zhǔn)適用于農(nóng)用微生物菌劑的功能評(píng)價(jià),,包括提供和活化養(yǎng)分、促進(jìn)作物生長(zhǎng),、土壤改良,、修復(fù)及有機(jī)物料腐熟等場(chǎng)景中微生物菌劑的檢測(cè)與評(píng)價(jià)[9]。
采用微生物染色法(如芽孢染色)結(jié)合顯微鏡觀察,,評(píng)估菌劑中特定微生物的活性與功能,。染色方法需符合標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的加熱固定、梯度脫色及復(fù)染流程[9],。
未明確具體數(shù)值,,但要求染色后的顯微觀察需達(dá)到芽孢與菌體顏色對(duì)比顯著(芽孢呈紅色/綠色,菌體呈藍(lán)色/紅色),,且至少檢出10^4 CFU/g有效活菌數(shù),。
菌劑樣品需含明確標(biāo)注的芽孢形成菌種(如枯草芽孢桿菌),菌齡控制在大部分芽孢未脫離菌體的階段,,避免過(guò)度老化或新生菌體干擾染色結(jié)果[9],。
1. 涂片固定:菌體均勻涂布載玻片,火焰加熱固定,;
2. 加熱染色:滴加染色液(如孔雀綠或石炭酸復(fù)紅),,微火加熱至冒蒸汽但不沸騰,維持3-5分鐘,;
3. 梯度脫色:95%酒精沖洗至無(wú)染液脫落,,水洗;
4. 復(fù)染:堿性美藍(lán)或番紅復(fù)染1-2分鐘,,水洗干燥后鏡檢[9],。
1. 加熱過(guò)程中需嚴(yán)格控制溫度,避免沸騰導(dǎo)致菌體破裂或染液蒸干,;
2. 染色結(jié)果需由兩名實(shí)驗(yàn)員獨(dú)立驗(yàn)證,,確保芽孢與菌體顏色區(qū)分明確;
3. 實(shí)驗(yàn)人員需穿戴防護(hù)裝備,,避免接觸有毒染液[9],。
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