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胰酪胨大豆羊血（TSSB）瓊脂/用于蠟樣芽孢桿菌的溶血測試實(shí)驗(yàn)（GB179/GB180/GB4789.14-2014/GB008-1）

HB0251-1

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250g

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胰酪胨大豆羊血（TSSB）瓊脂介紹：

用途：用于蠟樣芽孢桿菌的溶血測試實(shí)驗(yàn),。

添加劑：每瓶需配套添加?1001339-1 脫纖維羊血使用,。

成分（g/L）

胰酪胨	15.0
植物蛋白胨	5.0
氯化鈉	5.0
無水磷酸氫二鉀	2.5
葡萄糖	2.5
瓊脂	12.0
PH值7.2±0.2	25℃

檢驗(yàn)原理：胰酪胨、植物蛋白胨在培養(yǎng)基中作為營養(yǎng)物質(zhì)提供菌體生長所需的碳源,、氮源,、維生素及礦質(zhì)元素等；無水磷酸二氫鈉作為pH緩沖體系,；瓊脂作為凝固劑,；脫纖維羊血提供紅細(xì)胞，檢測微生物溶血特性,。

用法：

稱取本品42.0g,，加熱攪拌溶解于1000ml蒸餾水中，分裝,，每瓶100ml,，121℃高壓滅菌15分鐘，冷至45－50℃時,加入5-10ml無菌脫纖維羊血,，混勻后傾注平板,，備用。

質(zhì)量控制和典型特征：

在30-32℃培養(yǎng)18-24小時,，蠟樣芽孢桿菌典型特征為在菌落周圍呈現(xiàn)β型完全溶血的溶血環(huán),。

胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎(chǔ)微生物靈敏度試驗(yàn)：

按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,，接種以下質(zhì)控菌株，放置30±1℃需氧培養(yǎng)24±2小時,。

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產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品說明及用途
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1001339-1	脫纖維羊血Off fiber sheep blood	50ml	每100mlHB0251中加入7ml脫纖維羊血
HB0249b	多粘菌素B（2.25萬單位）	2.25萬單位*5支	每支添加于225ml胰酪胨大豆多粘菌素肉湯基礎(chǔ)中
HBJ016	含225mL胰酪胨大豆多粘菌素肉湯均質(zhì)袋	10個/盒	用于蠟樣芽孢桿菌的前增菌培養(yǎng)（GB)
GB179	D-甘露醇發(fā)酵管（枯草芽孢桿菌）	20支	用于枯草芽孢桿菌生化試驗(yàn)
GB180	丙酸鹽（枯草芽孢桿菌）	20支	用于枯草芽孢桿菌生化試驗(yàn)
HB0249-1	胰酪胨大豆多粘菌素肉湯基礎(chǔ)Trypticase-Soy-Polymyxin Broth Base	250g	用于蠟樣芽孢桿菌選擇性的增菌培養(yǎng)
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HB8500	NAC瓊脂培養(yǎng)基NAC Agar Medium	250g	用于綠膿假單胞菌的分離培養(yǎng)
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HB8699a	0.1%溶菌酶溶液	1ml*5	每支添加于99ml溶菌酶肉湯基礎(chǔ)中
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HB4177-1	硫酸錳營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基Manganese Nutrient Agar Medium	250g	用于需氧芽孢桿菌的芽孢培養(yǎng)
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GB008-1	動力培養(yǎng)基	20支/盒	用于蠟樣芽胞桿菌的檢測（SN標(biāo)準(zhǔn)）
HBPM0252	酪蛋白瓊脂平板（9cm)Casein Agar Plate	9cm*10個/包	用于蠟樣芽孢桿菌的酪蛋白分解試驗(yàn)
HB0115-1	西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基Simmons Citrate Medium	250g	用于蠟樣芽孢桿菌利用檸檬酸鹽試驗(yàn)
HB8769	0.5%堿性復(fù)紅溶液	5ml*4	作為蠟樣芽孢桿菌蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗(yàn)用的染色液使用

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GB 4789.14-2014 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 蠟樣芽孢桿菌檢驗(yàn)

適用范圍	適用于食品中蠟樣芽孢桿菌的分離、培養(yǎng)及溶血特性檢測,，尤其針對其β-溶血現(xiàn)象的觀察[8],。
核心檢測方法	采用胰酪胨大豆羊血瓊脂培養(yǎng)基，通過菌落形態(tài),、溶血環(huán)特征（β-溶血）及生化試驗(yàn)（如葡萄糖分解,、硝酸鹽還原）進(jìn)行鑒定。
檢出限與定量限	最低檢出限為1 CFU/g,，定量范圍通常為10?-10? CFU/g，具體取決于樣品預(yù)處理方法,。
質(zhì)控樣品要求	需接種蠟樣芽孢桿菌ATCC11778（β-溶血陽性）,、覃狀芽孢桿菌ATCC10206（弱溶血）及巨大芽孢桿菌ATCC14581（無溶血）作為質(zhì)控菌株[1]。
關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)步驟	1. 培養(yǎng)基制備：45g干粉溶解于1L蒸餾水,，121℃滅菌15分鐘 2. 冷卻至45-50℃加入5%-10%無菌脫纖維羊血 3. 傾注平板（18-20ml/皿） 4. 30±1℃需氧培養(yǎng)24±2小時[1]
特別說明	羊血添加需嚴(yán)格控溫（45-50℃）,，防止溶血成分失活；培養(yǎng)基PH值需維持在7.2±0.2[1],。

SN/T 0176-2013 進(jìn)出口食品中蠟樣芽孢桿菌檢驗(yàn)方法

適用范圍	針對進(jìn)出口食品中蠟樣芽孢桿菌的檢驗(yàn),，特別強(qiáng)調(diào)溶血試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化操作及結(jié)果判讀[8]。
核心檢測方法	規(guī)定使用TSSB瓊脂進(jìn)行初篩,，結(jié)合動力試驗(yàn),、硝酸鹽還原試驗(yàn)等確認(rèn)菌株特性。
質(zhì)控樣品要求	要求每批次培養(yǎng)基需用標(biāo)準(zhǔn)菌株驗(yàn)證溶血性能,，并記錄溶血環(huán)直徑（β-溶血環(huán)≥2mm為陽性）,。
關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)步驟	1. 樣品均質(zhì)后30℃預(yù)增菌6小時 2. 劃線接種TSSB平板 3. 定量檢測時需進(jìn)行10倍系列稀釋 4. 溶血觀察需在培養(yǎng)后立即進(jìn)行
特別說明	進(jìn)出口檢驗(yàn)需額外增加生物安全試驗(yàn)，排除潛在致病性菌株,；培養(yǎng)基有效期開封后不得超過1個月,。

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