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硝酸鹽肉湯/用于蠟樣芽孢桿菌硝酸鹽還原試驗(yàn)（GB033/SN047/GB179/GB180/GB4789.14-2014/GB008-1）

HB0277

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硝酸鹽肉湯介紹：

用途：用于蠟樣芽孢桿菌硝酸鹽還原試驗(yàn)。

添加劑：每盒需配套添加1盒HB8282 硝酸鹽還原試劑使用,。

成分（g/L）

牛肉浸粉	3.0
蛋白胨	5.0
硝酸鉀	1.0
pH值7.0±0.1	25℃

硝酸鹽還原試驗(yàn)原理：

蛋白胨和牛肉浸粉提供碳氮源,、維生素和生長(zhǎng)因子；某些細(xì)菌可利用硝酸鹽產(chǎn)亞硝酸鹽,、氨或氮?dú)?。滴加硝酸鹽還原試劑后若試驗(yàn)菌培養(yǎng)物中有亞硝酸鹽,，可與乙酸、對(duì)苯氨基苯磺酸和α-萘胺反應(yīng)生成紅色的N-α-苯胺偶氮苯磺酸,。若試驗(yàn)菌可利用硝酸鹽產(chǎn)亞硝酸鹽進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為氮?dú)?，則小倒管中會(huì)有氣體囤積，判定為陽性,。若試驗(yàn)菌可將亞硝酸鹽轉(zhuǎn)化為氨,，則滴加硝酸鹽還原試劑呈無色反應(yīng)，此時(shí)需加入適量鋅粉證明培養(yǎng)物中是否有未被利用的硝酸鹽存在,，若加入鋅粉后為無色則證明無硝酸鹽,，則可判斷為陽性。試驗(yàn)菌不利用硝酸鹽,，滴加硝酸鹽還原試劑后為無色,，加入鋅粉后變?yōu)榧t色，證明培養(yǎng)物中有未被利用的硝酸鹽被鋅粉還原為亞硝酸鹽產(chǎn)生紅色反應(yīng),，此時(shí)判斷為陰性,。

用法：

稱取本品9.0g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中,，分裝試管,，每管5ml，121℃高壓滅菌15分鐘,，備用,，

硝酸鹽肉湯微生物質(zhì)控結(jié)果：

在硝酸鹽肉湯中，福氏志賀氏菌,、大腸埃希氏菌,、蠟樣芽胞桿菌生長(zhǎng)，溶液變紅色,，

單增李斯特氏菌生長(zhǎng),，溶液不變紅色，仍為黃色,。

硝酸鹽肉湯微生物靈敏度試驗(yàn)：

按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,，接種以下質(zhì)控菌株，放置35±1℃需氧培養(yǎng)24±2小時(shí),。

硝酸鹽肉湯同名產(chǎn)品推薦：

GB033 硝酸鹽肉湯 20支

SN047 硝酸鹽肉湯（還原） 20支

GB033 硝酸鹽肉湯 20支

硝酸鹽肉湯相關(guān)產(chǎn)品：

產(chǎn)品貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品說明及用途
HB9204	液化GYE瓊脂培養(yǎng)基Liquefaction GYE Agar Medium	250g	用于凝結(jié)芽孢桿菌的計(jì)數(shù)培養(yǎng)
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1001339-1	脫纖維羊血Off fiber sheep blood	50ml	每100mlHB0251中加入7ml脫纖維羊血
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HB0115-1	西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基Simmons Citrate Medium	250g	用于蠟樣芽孢桿菌利用檸檬酸鹽試驗(yàn)
HB8769	0.5%堿性復(fù)紅溶液	5ml*4	作為蠟樣芽孢桿菌蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗(yàn)用的染色液使用

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ISO 3091:1975 標(biāo)準(zhǔn)解讀

適用范圍	本標(biāo)準(zhǔn)適用于肉及肉制品中硝酸鹽含量的測(cè)定,，特別針對(duì)加工肉制品的質(zhì)量控制[1],。

核心檢測(cè)方法

采用分光光度法：
1. 熱水提取樣品中的硝酸鹽
2. 蛋白質(zhì)沉淀后過濾處理
3. 鎘柱還原硝酸鹽為亞硝酸鹽
4. 磺胺與鹽酸萘乙二胺顯色反應(yīng)
5. 538 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度[1]

檢出限與定量限

未明確限定具體數(shù)值,，但方法靈敏度取決于分光光度計(jì)精度，建議校準(zhǔn)儀器至0.1 mg/kg量級(jí)檢測(cè)能力[1],。

質(zhì)控樣品要求

1. 樣品需均質(zhì)化處理至粒徑≤2 mm
2. 提取過程需控制水溫在80±5℃
3. 蛋白質(zhì)沉淀需完全,，濾液澄清透明
4. 鎘柱還原效率需≥95%[1]

關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)步驟

1. 樣品稱量精度需達(dá)0.001 g
2. 顯色反應(yīng)時(shí)間控制在15±1分鐘
3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線需覆蓋0-50 mg/kg濃度范圍
4. 每批次檢測(cè)需包含空白對(duì)照和加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)[1]

特別說明	1. 本方法為國際仲裁方法 2. 顯色試劑需現(xiàn)用現(xiàn)配 3. 鎘柱使用前后需用稀鹽酸活化 4. 適用于硝酸鹽含量≥10 mg/kg的樣品[1]

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