硝酸鹽肉湯/用于蠟樣芽孢桿菌硝酸鹽還原試驗(yàn)
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2216E海水瓊脂即用型平板
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酵母浸粉
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胰蛋白胨
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DSMZ231培養(yǎng)基
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含20%蔗糖的麥芽即用型平板
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用途:用于蠟樣芽孢桿菌硝酸鹽還原試驗(yàn)。
添加劑:每盒需配套添加1盒HB8282 硝酸鹽還原試劑使用。
成分(g/L)
硝酸鹽還原試驗(yàn)原理:
蛋白胨和牛肉浸粉提供碳氮源、維生素和生長(zhǎng)因子;某些細(xì)菌可利用硝酸鹽產(chǎn)亞硝酸鹽、氨或氮?dú)狻5渭酉跛猁}還原試劑后若試驗(yàn)菌培養(yǎng)物中有亞硝酸鹽,可與乙酸、對(duì)苯氨基苯磺酸和α-萘胺反應(yīng)生成紅色的N-α-苯胺偶氮苯磺酸。若試驗(yàn)菌可利用硝酸鹽產(chǎn)亞硝酸鹽進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為氮?dú)猓瑒t小倒管中會(huì)有氣體囤積,判定為陽(yáng)性。若試驗(yàn)菌可將亞硝酸鹽轉(zhuǎn)化為氨,則滴加硝酸鹽還原試劑呈無(wú)色反應(yīng),此時(shí)需加入適量鋅粉證明培養(yǎng)物中是否有未被利用的硝酸鹽存在,若加入鋅粉后為無(wú)色則證明無(wú)硝酸鹽,則可判斷為陽(yáng)性。試驗(yàn)菌不利用硝酸鹽,滴加硝酸鹽還原試劑后為無(wú)色,加入鋅粉后變?yōu)榧t色,證明培養(yǎng)物中有未被利用的硝酸鹽被鋅粉還原為亞硝酸鹽產(chǎn)生紅色反應(yīng),此時(shí)判斷為陰性。
用法:
稱取本品9.0g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝試管,每管5ml,121℃高壓滅菌15分鐘,備用,
硝酸鹽肉湯微生物質(zhì)控結(jié)果:
在硝酸鹽肉湯中,福氏志賀氏菌、大腸埃希氏菌、蠟樣芽胞桿菌生長(zhǎng),溶液變紅色,
單增李斯特氏菌生長(zhǎng),溶液不變紅色,仍為黃色。
硝酸鹽肉湯微生物靈敏度試驗(yàn):
按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,接種以下質(zhì)控菌株,放置35±1℃需氧培養(yǎng)24±2小時(shí)。
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1. 熱水提取樣品中的硝酸鹽
2. 蛋白質(zhì)沉淀后過濾處理
3. 鎘柱還原硝酸鹽為亞硝酸鹽
4. 磺胺與鹽酸萘乙二胺顯色反應(yīng)
5. 538 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度[1]
2. 提取過程需控制水溫在80±5℃
3. 蛋白質(zhì)沉淀需完全,濾液澄清透明
4. 鎘柱還原效率需≥95%[1]
2. 顯色反應(yīng)時(shí)間控制在15±1分鐘
3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線需覆蓋0-50 mg/kg濃度范圍
4. 每批次檢測(cè)需包含空白對(duì)照和加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)[1]
2. 顯色試劑需現(xiàn)用現(xiàn)配
3. 鎘柱使用前后需用稀鹽酸活化
4. 適用于硝酸鹽含量≥10 mg/kg的樣品[1]
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