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蠟樣芽孢桿菌選擇性瓊脂基礎(chǔ)/用于蠟樣芽孢桿菌的選擇性分離培養(yǎng)（GB179/GB180/GB4789.14-2014/GB008-1）

HB0280

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蠟樣芽孢桿菌選擇性瓊脂基礎(chǔ)介紹：

用途：用于蠟樣芽胞桿菌的選擇性分離培養(yǎng)

添加劑：每瓶需配套添加12盒 HB0248a 多粘菌素B和12盒 HB8295 50%卵黃乳液使用,，每100ml蠟樣芽孢桿菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)中添加1支HB0248a和2支HB8295。

成分（g/L）

胰酪蛋白胨	10.0
牛肉浸粉	1.0
D-甘露醇	10.0
氯化鈉	10.0
苯酚紅	0.025
瓊脂	12.0
pH值7.2±0.2	25℃

檢驗原理：

胰酪蛋白胨,、牛肉浸粉提供微生物生長的基本營養(yǎng),，D-甘露醇為唯一可發(fā)酵糖類，蠟樣芽胞桿菌不發(fā)酵甘露醇,，菌落一般為橙紅色或粉紅色,，而發(fā)酵甘露醇的細菌因產(chǎn)酸而顯黃色，蠟樣芽胞桿菌可產(chǎn)生卵磷脂酶,，分解卵黃,，在菌落周圍產(chǎn)生沉淀環(huán)；氯化鈉維持均衡的滲透壓,；苯酚紅作為酸堿指示劑,；瓊脂為凝固劑。

用法：

稱取本品43.0g,，加熱溶解于1000ml蒸餾水中,，分裝每瓶100ml，121℃高壓滅菌15分鐘,，冷至50℃左右時,，每瓶加入10ml 50%的無菌卵黃乳液和多粘菌素B10000IU，混勻,，傾入無菌平皿,，備用。

蠟樣芽孢桿菌選擇性瓊脂基礎(chǔ)(盲樣分離)：


蠟樣芽胞桿菌(食品分離) 菌落為微粉紅色,，周圍有淡粉紅色沉淀環(huán)	蠟樣芽胞桿菌(環(huán)境分離) 菌落為微粉紅色,，周圍有淡粉紅色沉淀環(huán)

蠟樣芽孢桿菌選擇瓊脂基礎(chǔ)的微生物靈敏度試驗：

按標簽用法制備培養(yǎng)基,，接種以下質(zhì)控菌株，放置36±1℃需氧培養(yǎng)24-48小時,。注：回收率計算時,，用TSA瓊脂做對照培養(yǎng)基,。

蠟樣芽孢桿菌選擇性瓊脂基礎(chǔ)相關(guān)產(chǎn)品：

產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品說明及用途
HB9204	液化GYE瓊脂培養(yǎng)基Liquefaction GYE Agar Medium	250g	用于凝結(jié)芽孢桿菌的計數(shù)培養(yǎng)
HB0248	甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂基礎(chǔ)（MYP）Mannitol-Egg-Yolk-Polymyxin Agar Base	250g	用于蠟樣芽孢桿菌的固體平板計數(shù)（GB,、SN標準)
HB0250	改良V-P培養(yǎng)基V-P Medium,Modified	250g	用于蠟樣芽孢桿菌的V-P試驗
HB0251-1	胰酪胨大豆羊血（TSSB）瓊脂Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base	250g	用于蠟樣芽孢桿菌的溶血測試實驗
HB0252	酪蛋白瓊脂Casein Agar	250g	用于蠟樣芽孢桿菌的酪蛋白分解試驗
HB9258	檢測培養(yǎng)基Detection Medium	250g	用于凝結(jié)芽孢桿菌計數(shù)和培養(yǎng)
HB9195	酸水解酪蛋白胰蛋白胨（HCT）瓊脂培養(yǎng)基Hydrolysate 0f Casein Tryptone(HCT)Agar Medium	250g	用于檢測蘇云金桿菌的伴孢晶體
HB9219	葡萄糖酵母瓊脂培養(yǎng)基Glucose Yeast Agar Medium	250g	用于凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)
HBPM0251	胰酪胨大豆羊血瓊脂（TSSB）平板（9cm）(2-8℃)	9cm*5/包	用于蠟樣芽胞桿菌的分離、培養(yǎng)和溶血試驗
HB9259	甘露醇卵黃多粘菌素肉湯Mannitol-Egg-Yolk-Polymyxin Broth	250g	用于蠟樣芽孢桿菌選擇性增菌培養(yǎng)
HB8925-1	凝結(jié)芽孢桿菌檢測培養(yǎng)基Coagulation Bacillus Detection Medium	250g	用于凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)
HBPT8501	NAC液體培養(yǎng)基管（9ml）NAC Solid Medium	9ml*20	用于綠膿假單胞菌的增菌培養(yǎng)
HBPT8501-1	NAC液體培養(yǎng)基管（9ml） NAC Solid Medium	9ml*20	用于綠膿假單胞菌的增菌培養(yǎng)
HB0276	酚紅葡萄糖肉湯Phenol Red Dextrose Broth	250g	用于蠟樣芽孢桿菌葡萄糖分解試驗
HB0277	硝酸鹽肉湯Nitrate Broth	250g	用于蠟樣芽孢桿菌硝酸鹽還原試驗
HB0278	動力-硝酸鹽培養(yǎng)基（A法）Motility Nitrate Medium	250g	用于細菌的動力試驗和硝酸鹽還原試驗
HB0279	木糖-明膠培養(yǎng)基Xylose - gelatin medium	250g	用于蠟樣芽孢桿菌明膠液化試驗
HB0281	葡萄糖酪胨瓊脂Dextrose Casein-peptone Agar	250g	用于食品中臘樣芽孢桿菌鑒定和計數(shù)（APHA方法）
HB8925	凝結(jié)芽孢桿菌計數(shù)培養(yǎng)基Coagulation Bacillus Count Medium	250g	用于凝結(jié)芽孢桿菌的計數(shù)培養(yǎng)
HB0248a	多粘菌素B（1萬單位）Polymyxin B	1萬單位*5支	添加于100mlHB0249或HB0280或HB0248-1或HB0248中
HB8699	溶菌酶肉湯基礎(chǔ)Lysozyme Broth Base	250g	用于蠟樣芽孢桿菌的溶菌酶試驗
1001339-1	脫纖維羊血Off fiber sheep blood	50ml	每100mlHB0251中加入7ml脫纖維羊血
HB0249b	多粘菌素B（2.25萬單位）	2.25萬單位*5支	每支添加于225ml胰酪胨大豆多粘菌素肉湯基礎(chǔ)中
HBJ016	含225mL胰酪胨大豆多粘菌素肉湯均質(zhì)袋	10個/盒	用于蠟樣芽孢桿菌的前增菌培養(yǎng)（GB)
GB179	D-甘露醇發(fā)酵管（枯草芽孢桿菌）	20支	用于枯草芽孢桿菌生化試驗
GB180	丙酸鹽（枯草芽孢桿菌）	20支	用于枯草芽孢桿菌生化試驗
HB0249-1	胰酪胨大豆多粘菌素肉湯基礎(chǔ)Trypticase-Soy-Polymyxin Broth Base	250g	用于蠟樣芽孢桿菌選擇性的增菌培養(yǎng)
HB8480	肝湯Liver Broth	250g	用于嗜熱菌芽孢的鑒別培養(yǎng)
HB8500	NAC瓊脂培養(yǎng)基NAC Agar Medium	250g	用于綠膿假單胞菌的分離培養(yǎng)
HB8501	NAC液體培養(yǎng)基NAC Solid Medium	250g	用于綠膿假單胞菌的增菌培養(yǎng)
HB8538	NGKG寒天基礎(chǔ)培地NGKG Medium	250g	用于食品中蠟樣芽孢桿菌分離培養(yǎng)
HB8699a	0.1%溶菌酶溶液	1ml*5	每支添加于99ml溶菌酶肉湯基礎(chǔ)中
HB8834	鄰單胞菌鑒別瓊脂Plesiomomas Differential Agar	250g	用于鄰單胞菌的分離培養(yǎng)
HB8699-1	溶菌酶營養(yǎng)肉湯Lysozyme Nutrient Broth	250g	用于蠟樣芽胞桿菌溶菌酶試驗（GB4789.14-2014）
HB4177-1	硫酸錳營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基Manganese Nutrient Agar Medium	250g	用于需氧芽孢桿菌的芽孢培養(yǎng)
HB4168-6	動力培養(yǎng)基Motility Test Medium	250g	用于動力試驗
GB008-1	動力培養(yǎng)基	20支/盒	用于蠟樣芽胞桿菌的檢測（SN標準）
HBPM0252	酪蛋白瓊脂平板（9cm)Casein Agar Plate	9cm*10個/包	用于蠟樣芽孢桿菌的酪蛋白分解試驗
HB0115-1	西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基Simmons Citrate Medium	250g	用于蠟樣芽孢桿菌利用檸檬酸鹽試驗
HB8769	0.5%堿性復紅溶液	5ml*4	作為蠟樣芽孢桿菌蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗用的染色液使用

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一、適用范圍

本標準（GB4789.14-2014）適用于食品中蠟樣芽孢桿菌的定性及定量檢測,，涵蓋肉制品,、乳制品、谷物制品等各類食品基質(zhì)[5],。

二,、核心檢測方法

采用選擇性瓊脂培養(yǎng)基分離法：
1. 第一法：常規(guī)計數(shù)法（菌落形成單位計數(shù)）
2. 第二法：MPN法（最可能數(shù)法），適用于低污染樣品檢測[5]

三,、檢出限與定量限

定量檢測限≥10 CFU/g,，定性檢出限為1 CFU/25g。食品安全風險閾值設(shè)定為≥10? CFU/g[5][8]

四,、質(zhì)控樣品要求

每批次實驗需包含：
? 陽性對照：蠟樣芽孢桿菌標準菌株（ATCC 11778）
? 陰性對照：枯草芽孢桿菌標準菌株
? 空白對照：無菌生理鹽水[5]

五,、關(guān)鍵實驗步驟

1. 樣品前處理：25g樣品+225mL稀釋液均質(zhì)
2. 選擇性培養(yǎng)：接種MYP瓊脂（甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂）
3. 培養(yǎng)條件：30±1℃需氧培養(yǎng)24±2h
4. 菌落驗證：典型菌落進行革蘭氏染色、動力試驗及生化鑒定[5][8]

六,、特別說明

1. 需區(qū)分蠟樣芽孢桿菌與蘇云金芽孢桿菌等近緣種
2. 檢測含防腐劑樣品時需增加中和劑
3. 培養(yǎng)基配制后應在2-8℃避光保存,，有效期7天[5][9]

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