動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基(A法)/用于細(xì)菌的動(dòng)力試驗(yàn)和硝酸鹽還原試驗(yàn)
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用途:用于細(xì)菌的動(dòng)力試驗(yàn)和硝酸鹽還原試驗(yàn)。
成分(g/L)
檢驗(yàn)原理: 蛋白胨和牛肉浸粉提供氮源、維生素、礦物質(zhì);硝酸鉀被某些細(xì)菌還原為亞硝酸鹽;較少量的瓊脂作為培養(yǎng)基的凝固劑。
用法:
稱取本品13.0g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝試管,每管10ml,121℃高壓滅菌15min,備用。
不同細(xì)菌在動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)特征:
動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基(A法)微生物靈敏度試驗(yàn):
按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,接種以下質(zhì)控菌株,放置36±1℃需氧培養(yǎng)18-24小時(shí)。
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適用于飲用天然礦泉水及其他水樣中產(chǎn)氣莢膜梭菌的定性檢測(cè),通過動(dòng)力及硝酸鹽還原反應(yīng)判斷細(xì)菌特性[4]。
穿刺接種后觀察動(dòng)力表現(xiàn),滴加硝酸鹽還原試劑(甲液和乙液)檢測(cè)亞硝酸鹽生成[4]。
未明確檢出限,定性檢測(cè)以是否呈現(xiàn)紅色反應(yīng)判定硝酸鹽還原陽性。
需使用標(biāo)準(zhǔn)菌株(如產(chǎn)氣莢膜梭菌)進(jìn)行陽性對(duì)照,并設(shè)置大腸埃希氏菌等陰性對(duì)照[4]。
1. 培養(yǎng)基制備:溶解12g干粉于1L蒸餾水,121℃滅菌15分鐘;
2. 垂直穿刺接種;
3. 36℃培養(yǎng)24小時(shí)后觀察動(dòng)力;
4. 滴加硝酸鹽試劑觀察顯色反應(yīng)[4]。
硝酸鹽還原試驗(yàn)需新鮮配制試劑,避免假陰性;穿刺接種時(shí)需避免觸底,影響動(dòng)力觀察[4]。
規(guī)定食品微生物檢驗(yàn)中動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基的配方、制備及質(zhì)量控制要求[4]。
明確培養(yǎng)基成分配比(蛋白胨5g、牛肉膏3g、硝酸鉀1g、瓊脂3g),pH7.0±0.2[4]。
培養(yǎng)基需通過無菌試驗(yàn)、生長(zhǎng)試驗(yàn)(產(chǎn)氣莢膜梭菌生長(zhǎng)良好)及生化反應(yīng)驗(yàn)證。
1. 分裝試管時(shí)避免凝固前震蕩;
2. 滅菌后垂直靜置形成直立柱狀培養(yǎng)基[4]。
培養(yǎng)基凝固后需檢查水分蒸發(fā)情況,若出現(xiàn)裂縫需重新制備。
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