纖維素剛果紅培養(yǎng)基/用于檢測(cè)纖維分解微生物
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2216E海水瓊脂即用型平板
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酵母浸粉
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含20%蔗糖的麥芽即用型平板
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用途:用于微生物的纖維素利用試驗(yàn)。
檢驗(yàn)原理:
硝酸鈉作為無(wú)機(jī)氮源;磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀為緩沖劑;硫酸鎂、氯化鉀提供生長(zhǎng)因子;酵母浸出粉、酸水解酪蛋白可提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子;剛果紅作為顯色劑同時(shí)與大分子多糖牢固結(jié)合;纖維素粉是大分子多糖,當(dāng)微生物產(chǎn)生纖維素酶后,與剛果紅結(jié)合的纖維素被分解為小分子單糖,剛果紅無(wú)法與單糖結(jié)合使培養(yǎng)基上呈現(xiàn)透明圈;瓊脂為培養(yǎng)基的凝固劑。
成分(g/L)
用法:
稱(chēng)取本品25.3g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅菌 15 分鐘,備用。
注:培養(yǎng)基中纖維素粉不溶解,滅菌后有沉淀。
纖維素剛果紅培養(yǎng)基微生物靈敏度試驗(yàn):
按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,接種以下質(zhì)控菌株,放置25-28℃需氧培養(yǎng)48-96小時(shí)。
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適用于土壤、堆肥等樣品中纖維素分解菌的分離和篩選,通過(guò)透明圈現(xiàn)象判斷菌株產(chǎn)纖維素酶能力[6]。
1. 后染色法:菌落形成后覆蓋1 mg/mL剛果紅溶液,10-15分鐘后倒去,加入1 mol/L NaCl溶液洗脫未結(jié)合染料[2]
2. 預(yù)染色法:滅菌后按200:1比例將剛果紅溶液加入培養(yǎng)基,直接觀察透明圈[2]
透明圈直徑與菌落直徑比值≥2.0可判定為陽(yáng)性菌株,比值越大表示纖維素酶活性越強(qiáng)[6]
1. 陽(yáng)性對(duì)照:已知產(chǎn)纖維素酶菌株(如綠色木霉)
2. 陰性對(duì)照:非纖維素分解菌(如大腸桿菌)
3. 培養(yǎng)基pH需嚴(yán)格控制在7.0±0.2[3]
1. 培養(yǎng)基滅菌后冷卻至50℃時(shí)加入纖維素粉和剛果紅[3]
2. 培養(yǎng)溫度保持28-30℃,培養(yǎng)時(shí)間5-7天
3. NaCl洗滌時(shí)間嚴(yán)格控制在15分鐘內(nèi)[2]
1. 剛果紅僅與β-1,4糖苷鍵結(jié)合的纖維素反應(yīng),不與單糖或二糖結(jié)合[6]
2. 培養(yǎng)基中纖維素粉需保持顆粒狀以形成非溶解性底物
3. 菌落直徑需控制在2-5mm時(shí)進(jìn)行染色觀察[2]
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