丁酸梭菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基/用于飼料添加劑中丁酸梭菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)(GB/T 1741/GB162)
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成分(g/L) :
稱取本品56.0g,加熱煮沸溶解于1000ml蒸餾水中,,分裝,,121℃高壓滅菌15-20分鐘,備用,。
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一,、適用范圍
二,、核心檢測(cè)方法
2. 熒光定量PCR法:快速鑒定丁酸梭菌特異性基因,,準(zhǔn)確率高于生化鑒定和MALDI-TOF MS[4],。
三、檢出限與定量限
2. 熒光定量PCR檢測(cè)靈敏度:可識(shí)別單拷貝基因[4]
四,、質(zhì)控樣品要求
2. 陰性對(duì)照:含非目標(biāo)菌的空白基質(zhì)
3. 樣品活菌濃度:需保持在10?-10? CFU/g檢測(cè)范圍內(nèi)[4]
五,、關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)步驟
2. 厭氧培養(yǎng):37℃恒溫培養(yǎng)48-72小時(shí)
3. DNA提取:采用CTAB法提取菌體基因組
4. PCR擴(kuò)增:使用Cbut_1074基因特異性引物[4]
六,、特別說明
2. 抗生素耐受性檢測(cè):確保與氨芐西林等抗生素聯(lián)用有效性[10]
3. 芽孢活化:檢測(cè)前需進(jìn)行80℃/10min熱處理激活芽孢
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