MR-VP培養(yǎng)基/用于大腸桿菌的甲基紅實驗和VP實驗(GB095/GB4789.40/GB/T20944.1/GB4789.41-2016)
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用途:用于大腸桿菌的甲基紅試驗和VP試驗,。
添加劑:需配套甲基紅試劑盒及V-P試劑盒使用。
成分(g/L)
月示胨提供碳氮源,、維生素和生長因子;葡萄糖為可發(fā)酵的糖類;磷酸氫二鉀是緩沖劑,。
用法:
稱取本品1.7g,加熱溶解于100ml蒸餾水中,分裝試管,,121℃高壓滅菌15分鐘,,備用。
試驗方法:
1,、甲基紅(MR)試驗取適量瓊脂培養(yǎng)物接種于緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR-VP),,36 ℃±1 ℃培養(yǎng)2 d~5 d。滴加甲基紅試劑(此試劑需另行購買)一滴,,立即觀察結果,。鮮紅色為陽性,黃色為陰性,。2,、V-P試驗取適量瓊脂培養(yǎng)物接種于緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR-VP),,36 ℃±1 ℃培養(yǎng)2 d~4 d,滴加V-P試劑盒(此試劑需另行購買)充分振搖試管,觀察結果,。陽性反應立刻或于數(shù)分鐘內出現(xiàn)紅色,,如為陰性,應放在36℃±1 ℃繼續(xù)培養(yǎng)4 h 再進行觀察,。
MR實驗
在MR實驗中大腸埃希氏菌變紅,;單增李斯特氏菌變紅;普通變形桿菌變紅,;產氣腸桿菌不變紅,;大腸埃希氏菌0157變紅。
VP實驗
在VP實驗中大腸埃希氏菌不變紅,;單增李斯特氏菌變紅,;普通變形桿菌不變紅,;產氣腸桿菌變紅,;大腸埃希氏菌0157不變紅。
MR-VP培養(yǎng)基微生物靈敏度試驗:
按標簽用法制備培養(yǎng)基,,接種以下質控菌株,,放置36±1℃需氧培養(yǎng)48±2小時。
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SN/T 0169-2010《進出口食品中大腸菌群、大腸桿菌檢測方法》
適用于食品,、藥品等樣品中大腸桿菌的甲基紅(MR)和Voges-Proskauer(VP)生化試驗檢測,,用于區(qū)分腸道桿菌科不同菌屬的代謝特征[3][6],。
1. MR試驗:檢測細菌分解葡萄糖產酸能力,陽性反應呈紅色,;
2. VP試驗:檢測細菌生成乙酰甲基甲醇的能力,,陽性反應呈紅色[4][6]。
該方法為定性檢測,,無明確檢出限與定量限要求,。結果判定依據(jù)顏色變化,需在培養(yǎng)后立即觀察[3][6],。
需同步使用標準菌株(如大腸桿菌ATCC 25922為MR+/VP-,,產氣腸桿菌ATCC 13048為MR-/VP+)進行對照試驗,確保培養(yǎng)基和試劑有效性[3][4],。
1. 接種:取純培養(yǎng)物接種于MR-VP培養(yǎng)基,;
2. 培養(yǎng):36±1℃培養(yǎng)48小時;
3. MR試驗:滴加甲基紅試劑觀察,;
4. VP試驗:加入α-萘酚和KOH試劑,,震蕩后觀察[3][6]。
1. MR和VP試驗需使用同一培養(yǎng)基,,但須分裝不同試管檢測,;
2. VP試劑需現(xiàn)用現(xiàn)配,,避免氧化失效,;
3. 部分菌株可能出現(xiàn)MR和VP雙陽性,需結合其他生化試驗綜合判斷[4][6],。
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