腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂（VRBDA）/用于腸道菌計(jì)數(shù)和腸桿菌科鑒別（GB095/GB/T20944.1/GB4789.41-2016）
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MH瓊脂即用型平板
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蛋白瘤胃球菌培養(yǎng)基基礎(chǔ)（含纖維二糖）
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CASO瓊脂
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改良MRS瓊脂即用型平板
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用途：用于腸道菌計(jì)數(shù)和腸桿菌科鑒別。
成分（g/L）
檢驗(yàn)原理：
蛋白胨,、酵母粉在培養(yǎng)基中作為基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)提供菌體細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的氮源,、維生素及其它的礦質(zhì)元素；葡萄糖作為可發(fā)酵的碳水化合物,；中性紅作為指示劑,，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸使中性紅指示劑變色,，從而使的菌落呈紅色；膽鹽及結(jié)晶紫可抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng),。
用法：
稱取本品39.5g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中,，煮沸不要超過(guò)2分鐘,，冷至50℃左右時(shí)，傾入無(wú)菌平皿,。無(wú)需高壓滅菌,。
腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂（VRBDA）上細(xì)菌的生長(zhǎng)特征：
a:糞腸球菌，b:大腸埃希氏菌,，c:鼠傷寒沙門氏菌,，d:福氏志賀氏菌
腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂(VRBDA)的微生物靈敏度試驗(yàn)：
按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基，接種以下質(zhì)控菌株,，放置36±1℃需氧培養(yǎng)18-24小時(shí),。
以上信息僅供參考，請(qǐng)以實(shí)物批次為準(zhǔn),！
GB 4789.3-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)
適用于食品中大腸菌群的定量檢測(cè),，包括食品生產(chǎn)加工環(huán)節(jié)的衛(wèi)生監(jiān)控及終產(chǎn)品檢驗(yàn)[1][7]。
采用VRBDA平板計(jì)數(shù)法,，通過(guò)膽鹽與結(jié)晶紫選擇性抑制非目標(biāo)菌,，中性紅指示劑識(shí)別發(fā)酵葡萄糖的菌落[7]。
檢出限為10 CFU/g（mL）,，定量范圍為10-1000 CFU/g（mL）[7],。
需同步進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照（大腸埃希氏菌ATCC 25922）和陰性對(duì)照（無(wú)菌生理鹽水）實(shí)驗(yàn)，陽(yáng)性回收率應(yīng)≥70%[7],。
1. 樣品均質(zhì)后梯度稀釋,；2. 選擇2-3個(gè)適宜稀釋度傾注VRBDA平板；3. 36±1℃倒置培養(yǎng)18-24小時(shí),；4. 計(jì)數(shù)紫紅色有膽鹽沉淀環(huán)的菌落[1][7],。
培養(yǎng)時(shí)間超過(guò)24小時(shí)可能導(dǎo)致革蘭氏陽(yáng)性菌過(guò)度生長(zhǎng)干擾結(jié)果判讀[7],。
SN/T 1870-2016 出口食品中致病菌檢測(cè)方法 實(shí)時(shí)熒光PCR法
適用于腸桿菌科細(xì)菌的快速篩查，包括沙門氏菌,、志賀氏菌等食源性致病菌檢測(cè)[10],。
VRBDA預(yù)增菌后結(jié)合熒光PCR技術(shù)，針對(duì)保守基因序列設(shè)計(jì)特異性引物探針[10],。
絕對(duì)檢出限為10 CFU/25g,，定量檢測(cè)需配合平板計(jì)數(shù)法[10]。
每批次需包含陰性對(duì)照,、陽(yáng)性對(duì)照和過(guò)程對(duì)照，CT值偏差需≤2個(gè)循環(huán)[10],。
1. VRBDA平板分離可疑菌落,；2. 純培養(yǎng)后提取DNA；3. 實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增,；4. 熔解曲線分析確認(rèn)產(chǎn)物特異性[10],。
該方法需與生化鑒定配套使用，不可單獨(dú)作為陽(yáng)性結(jié)果判定依據(jù)[10],。
FDA BAM Chapter 4 腸桿菌科檢測(cè)指南
適用于食品及環(huán)境樣品中腸桿菌科的定性與定量檢測(cè)[1][7],。
采用VRBDA雙層平板法，下層為選擇性培養(yǎng)基,，上層覆蓋無(wú)菌瓊脂增強(qiáng)菌落特征顯示[7],。
定量檢測(cè)限為1 CFU/g，定性檢測(cè)限為0.1 CFU/g[7],。
要求使用ATCC 25922和ATCC 13076作為質(zhì)控菌株,，每周進(jìn)行培養(yǎng)基性能驗(yàn)證[7]。
1. 44.5℃水浴中傾注上層瓊脂,；2. 培養(yǎng)后觀察雙層界面菌落,；3. 氧化酶試驗(yàn)排除假陽(yáng)性[7]。
需控制培養(yǎng)基pH在7.3±0.2,，pH偏差超過(guò)0.3需重新配制[7],。
以上信息僅供參考，請(qǐng)以相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的原文為準(zhǔn),！