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乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基(GB5009.285-2022維生素B12的測定)/用于萊士曼乳酸桿菌增菌培養(yǎng)

HB8637-2

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用途:用于萊士曼乳酸桿菌增菌培養(yǎng),。

成分（g/L）

三號蛋白胨	7.5
酵母浸膏	7.5
磷酸二氫鉀	2.0
葡萄糖	10.0
番茄汁	2.5
聚山梨糖單油酸酯	1.0
pH值6.8±0.1	25℃

檢驗原理

胨化乳和酵母浸粉提供碳氮源,、維生素和生長因子,；葡萄糖是乳酸菌可利用的糖,；磷酸二氫鉀是酸堿緩沖劑,；蕃茄浸出粉有利于乳酸菌的生長。

用法

稱取本品30.5g,，加熱煮沸溶解于1000ml蒸餾水中,，分裝試管，每管10ml,121℃高壓滅菌15分鐘，制成斜面,，備用,。

注：培養(yǎng)基中含不溶性番茄粉，配制后的培養(yǎng)基有沉淀,。

不同細(xì)菌在乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基上的生長特征：

乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基微生物靈敏度試驗:

按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,，接種以下質(zhì)控菌株，放置36±1℃需氧培養(yǎng)24-48小時,。

乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基原理及現(xiàn)象：

以上信息僅供參考,，請以實物批次為準(zhǔn)！

GB 5009.285-2022 核心解讀

適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品,、乳及乳制品,、肉及肉制品中維生素B12的測定。第一法（液相色譜法）適用于上述食品基質(zhì),；第二法（液相色譜-質(zhì)譜法）擴展至即食谷物,、烘焙食品、果凍及飲料,；第三法（微生物法）僅限嬰幼兒食品及乳制品[1][3],。

核心檢測方法

1. 第一法：酶解處理后用氧化劑轉(zhuǎn)化鈷胺素異構(gòu)體，免疫親和柱凈化濃縮后通過反相液相色譜分離,，紫外檢測定量
2. 第二法：基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),，適用于復(fù)雜基質(zhì)的高靈敏度檢測
3. 第三法：微生物法利用特定菌株對維生素B12的特異性需求進(jìn)行生物測定[1][3]

檢出限與定量限

液相色譜法檢出限為0.03μg/100g，定量限0.1μg/100g,；液相色譜-質(zhì)譜法靈敏度更高,，檢出限可達(dá)0.01μg/100g；微生物法檢出限為0.05μg/100g[1][4]

質(zhì)控樣品要求

標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液需現(xiàn)用現(xiàn)配,，濃度梯度為30-200ng/mL,；質(zhì)控樣需包含空白基質(zhì)加標(biāo)樣本，加標(biāo)回收率應(yīng)控制在85%-115%,，同批次測試需包含10%平行樣[1]

關(guān)鍵實驗步驟

1. 酶解處理：37℃恒溫水浴酶解16小時
2. 氧化轉(zhuǎn)化：加入氰化鉀溶液轉(zhuǎn)化異構(gòu)體
3. 凈化濃縮：免疫親和柱流速控制在1mL/min
4. 色譜條件：C18色譜柱,，流動相為甲醇-磷酸鹽緩沖體系[1][3]

特別說明

1. 含氰試劑操作需在通風(fēng)櫥進(jìn)行
2. 免疫親和柱保存溫度需≤8℃
3. 微生物法需嚴(yán)格無菌操作，菌種活化需使用特定培養(yǎng)基
4. 乳制品檢測需注意脂肪干擾,，需增加離心去脂步驟[1][3]

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