棉子糖發(fā)酵管-O157菌生化鑒定/用于大腸桿菌O157菌生化鑒定
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用途:用于大腸桿菌O157菌生化鑒定。
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本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品及環(huán)境樣本中大腸桿菌O157:H7/NM的分離與鑒定,涵蓋生化鑒定管(含棉子糖發(fā)酵試驗)在病原菌確認中的應(yīng)用[5]。
1. 山梨醇發(fā)酵試驗:觀察菌株對山梨醇的代謝能力
2. 棉子糖發(fā)酵試驗:檢測O157菌特異性發(fā)酵特性
3. 靛基質(zhì)試驗:驗證色氨酸酶活性
4. 氧化酶試驗:排除非腸桿菌科細菌[5]
? 最低檢出限:25g樣品中≥1CFU/g
? 定量范圍:101-106 CFU/mL(需配套平板計數(shù)法驗證)[5]
1. 陽性對照:ATCC 43888標(biāo)準(zhǔn)菌株(O157:H7)
2. 陰性對照:大腸桿菌ATCC 25922
3. 培養(yǎng)基質(zhì)控:每批次需驗證培養(yǎng)基促生長能力[5]
1. 菌落純化:營養(yǎng)瓊脂平板36℃±1℃培養(yǎng)18-24h
2. 菌懸液制備:2mL生理鹽水研磨菌落至均質(zhì)
3. 接種方法:100μL懸液接種生化管,動力試驗采用穿刺接種
4. 培養(yǎng)條件:36℃±1℃需氧培養(yǎng)24-48h[5]
? 氧化酶陰性為初篩必要條件
? 棉子糖陽性需結(jié)合山梨醇陰性結(jié)果判讀
? 氨基酸脫羧酶試驗需覆蓋礦物油隔絕氧氣
? 顯色反應(yīng)需在標(biāo)準(zhǔn)比色卡對照下判讀[5]
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